第4章基因组测序与序列组装3+1陈竺概述.ppt

第四章 基因组测序与序列组装 1、DNA测序的方法 链终止法测序 化学降解法测序 自动化测序 非常规DNA测序 1.1 链终止法测序 (the chain termination method) 基本原理: 通过合成与单链DNA互补的多核苷酸链，由于合成的互补链可在不同位置随机终止反应，产生只差一个核苷酸的DNA分子，从而来读取待测DNA分子的顺序。 1971年，吴瑞将引物延伸（primer extension）用于DNA测序。 吴瑞发明的联接子（linker）和衔接子（adaptor）迄今仍然是克隆DNA的常用工具 他主编的《重组DNA》曾风靡分子生物学和生物技术界。 上世纪80年代后，吴瑞在水稻转基因技术上有先导性贡献。 技术路线与要求 制备单链模板 ↓ 将单链模板与一小段引物退火 ↓ 加入DNA多聚酶 4种脱氧核苷酸 分别加入少量4种双脱氧核苷酸 ↓ 将4种反应产物分别在4条泳道电泳 ↓ 根据4个碱基在4条泳道的终止位置读出基因序列 蛋白水解酶水解有限产物,68000和35000的片段， 用途：双链DNA 5突出(5overhang)末端的补平(fill-in)；双链DNA 3突出(3overhang)的打平(也称削平)；5突出末端的标记；随机引物法进行DNA标