10蛋白质复性.ppt

蛋白质复性 主要内容： 包含体的形成和性质 包含体的纯化和溶解 蛋白质复性 基因工程取得的成果 A、基因工程的一般过程 B、抗虫棉、天然彩色棉 C、高附加值的药品： 白细胞介素-II、?-(or ?- or ?-)干扰素、humulin、牛生长素、anti-thrombin-III 、IgG、GM-CSF、TPA等 D、基因牛 存在的问题 A、包含体 B、N-端多一个蛋氨酸残基、表达产物未糖基化（大肠杆菌） C、表达产物过度糖基化，目标产物变成抗原（酵母） D、大肠杆菌的内毒素 包含体的解决方法（一般步骤） A、包含体的分离 B、包含体溶解、变性、还原，一般用尿素、盐酸胍、SDS C、变形蛋白质的复性和重新氧化 D、一般的分离纯化 例：人?-干扰素的后处理工艺 发酵液 离心(发酵液冷却至10?C以下，4000r/min离心10min) 菌体 细胞破碎(1倍体积细胞+10倍体积PBS buffer, 冰浴超声破碎5次, 30s/次, 4000r/min离心30min)，洗涤(0.1% Triton X-100溶液，1000r/min离心20min，重复三次) 包含体 提取变性(包含体+8M 尿素 pH 8.0 50mM Tris-HCl buffer 0.2 mM EDTA, 10mM DTT室温搅拌2h, 离心(15000r/min, 30mi