四核酸化学讲述.ppt

3. Western blotting 将蛋白质从电泳凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜上，然后同放射性同位素标记的特定蛋白质之抗体进行反应。 4、基因芯片 六、DNA的序列测定 DNA测序的解决得益于：高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳和限制性内切酶两种技术。 Maxam、Gilbert提出的化学断裂法 Sanger提出的双脱氧法 1、双脱氧法 双脱氧法也叫末端终止法 DNA复制的过程：DNA是一种双螺旋分子，其复制是在DNA聚合酶催化下，以原来的两条母链上的核苷酸序列为模板，通过互补配对的方式合成新DNA链的过程。复制需要引物和四种dNTPs，总是从5′-端向3′-端进行。细胞内DNA复制的引物一般是RNA，但体外DNA复制的引物可以是人工合成的与模板链互补的一段寡聚脱氧核苷酸。复制开始于引物3′-端自由的羟基，依据碱基互补配对的原则，不断地形成新的3′,5′-磷酸二酯键，使DNA链得到延伸，直到一个新的DNA分子完全被合成。 末端终止法步骤 进行四组平行反应 每一组反应混合物含有dATP, dGTP, dCTP和dTTP，被32P标记 每一组反应含有一种少量的ddATP或ddGTP或ddCTP或ddTTP。 在多数情况下，聚合酶使用正常的核苷酸，DNA合成正常延伸。 有时，聚合酶使用ddNTP，而导致末端终止。 每一组反应中ddNTP