基础分子生物学第五讲.ppt

DNA的脉冲电泳技术（PFGE — pulse-field gel electrophoresis） 如果因某个G残基的甲基化作用而阻止了蛋白质与DNA的结合，那么，六氢吡啶对这个甲基化G残基的切割作用，就只能在没有蛋白质结合的DNA中观察到。 （4）差别分析法 (RDA法，即 Representational difference analysis）； （5）酵母双杂交体系Two-hybrid system； （6）图位克隆法（map-based cloning）与染色体步移 （genomic DNA Walking）。 主要步骤： ①????????? 用32P标记DNA双链末端，并用RE切去一端； ②????????? 加入细胞特定周期蛋白质提取物，温育； ③????????? 加入适量DNaseI或硫酸二甲酯—六氢吡啶，使DNA链发生断裂。 这一反应中，DNaseI或硫酸二甲酯的用量非常关键，要保证一条链只发生一次断裂！ * * 3.你能用什么样的实验证明模板mRNA只能识别tRNA而不是氨基酸？ 4.已知大肠杆菌DNA总量为4.4x106bp, Cot1/2=9, 有一生物，其Cot1/2=3x10-1，求其细胞中的DNA总量。 三、问答题 1 .说说DNA组装成染色体的主要过程。 2 .写出肽链合成起始、延伸和终止三个阶段的主要步骤和主要因子。 1986 GMO首次在环境中释放。 ? 1988 J. D. Watson出任“人类基因组计划”首席科学家。 ? 1989 DuPont公司获得转肿瘤基因小鼠——“Oncomouse”。 ? 1992 欧共体35个实验室联合完成酵母第三染色体全序列测定(315kb)。 ? 4、从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA分子的受体细胞，并筛选出已经得到扩增的目的基因。 5、将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之在新的遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质。 无规则 a b c a b a 超大分子，不能有效地被一般电泳所分离。 a、b表示每次电泳的不同方向，c为DNA分子的最终移动方向。 应用脉冲电场技术，可分离高达107bp的DNA分子。