用ImagePro_Plus_分析免疫组化图片分解.ppt

用Image-Pro? Plus ( IPP ) 分析免疫组化图片 1.免疫组化图片分析原理 根据染色染料颜色的深浅(光密度)及分布面积大小来确定目标蛋白的量。 染色区域分布面积与目标蛋白量成正比。 染色的颜色深浅(光密度)与目标蛋白量的定量关系符合朗伯-比尔定律，是对数关系。 1.1光密度与灰度—迷惑人的不同概念 光密度：吸收光的物质的光学密度。（optical density,就是常说的OD值）光密度值是直接与染色物质的量相关的。 灰度：灰是不够黑，是反射亮度的单位。电子照片上像素的亮度称为灰度。 Gray: between white and black Example: 1.The bright value on display screen is gray value. 2.The dark value on a white paper is also the gray value. Optical Density:吸收光线的物质的光学密度. 被测物质的量越多，光密度(OD值)越高，透射出的光越少，反映在照片上就越黑。 OD值与物质的量直接相关，灰度值与OD值成对数关系，符合朗伯-比尔定律。 理论上OD值是从零到无穷大。实际应用中，OD值的范围常用0 - 2.0或者0 - 3.0。 用OD值是正确的 分光光度计与酶标仪的测定