基因工程(李立家)小题目及摘要.docVIP

基因工程试题及答案 1.标记（探针）（已知一个克隆在质粒载体上的500bpDNA 外源片段，请设计并用3种标记方法方案来对这个外源片段进行标记。 带有能检测的标记物的DNA或RNA叫探针。使DNA或RNA带有可检测的标记物的过程叫探针标记。 1）切口平移标记: 控制DNaseI的浓度，就可以在双链DNA分子的一条链的有限位置上打开切口，形成3-OH末端（这条链即成为引物）。DNA聚合酶I把一个带有标记物的dNTP就加在这引物的3-OH末端，而它的5-3的核酸外切酶活性将切除5-单核苷酸，同时依次添加新的核苷酸到3一侧，其结果使切口沿着DNA平移，这就叫切口平移（Nick translation) 2）随机引物标记: 能与任何DNA配对互补的一小段DNA序列叫随机引物。DNA聚合酶klenow大片段能在随机引物的引导下以带有标记物的dNTP为原料合成新的与模板DNA互补的探针。 3) PCR标记: 针对目的片段，设计好引物，以标记号的dNTP为原料合成新的与模板DNA互补的探针 4）末端核苷酸转移法: P32和多核苷酸激酶在5’端标记DNA或RNA。先用碱性磷酸酶处理去除DNA 5’的磷酸基团，多核苷酸激酶用于对缺乏 5-磷酸的 DNA 或合成接头进行磷酸化,同时可对末端进行标记。 补充： 常用的标记物包括：P32的同位素标记；荧光探针标记的dNTP；生物素；地高辛