第八章 RNA的生物合成.pptVIP

第八章 RNA的生物合成 (转录) （一）转录与复制的相似点　 （二）转录和复制的区别 在DNA分子双链上某一区段，一股链可转录，另一股链不转录； 模板链并非永远在同一单链上。 　　 双链DNA分子中能作为模板转录出RNA的那条链，称为模板链。又叫有义链（sense strand）,或Watson链,或负链(-链)。 　　　另一条互补链称为编码链，又叫反义链（antisense strand）或 Crick链,或正链(+链)。 　　　转录产物RNA的碱基序列，除了 T 变U 外，其余与编码链相同。 大肠杆菌RNA聚合酶各亚基的功能 真核生物中的RNA聚合酶可按其对?-鹅膏蕈碱的敏感性而分为三种。 启动子研究的RNA聚合酶保护法 ①在-25区有TATA框，又称为Hogness box或Goldberg-Hogness box。TATA框决定了转录起点的选择。 ②依赖ρ因子的终止 真核生物RNA合成的终止： 对真核生物转录的终止和机制了解很少。由于RNA转录后很快就进行加工，很难确定原初转录物的3’-末端。 在转录延长过程中，由局部打开的DNA双链、RNA聚合酶核心酶及新生成的RNA三者结合在一起的复合体，为空泡状结构，又称转录复合物。 每个转录单位都有一个启动子，一个终止子。 RNA聚合酶可识别终止子，终止转录，将新生RNA链释出，并离开模板DNA。 （一）转录起始 参与RNA-pol Ⅱ转录的TFⅡ （三）转录终止 　 加帽过程动画 RNApol (?2????) - DNA - pppGpN- OH 3? 转录起始复合物 转录起始动画 （二）转录延伸 1. ?亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA模板前移； 2. 在核心酶作用下，NTP不断聚合，RNA链不断延长。 (NMP)n + NTP ?? (NMP)n+1 + PPi RNA聚合酶在延伸RNA链时同时使DNA螺旋解链，RNA链的生长点是大约12bp长的RNA-DNA杂交区。 在RNA链离开模板时，此杂交区即复原，同时两条DNA链即又重复螺旋化。 转录速度约为30-50nt/S，但并不是以恒定速度进行的。 转录延伸过程示意图 转录泡（transcription bubble）： 5? 3? DNA 原核生物转录过程中的羽毛状现象 核糖体 RNA RNA聚合酶 转录未完成，翻译已开始进行。 （三）转录终止 四、真核生物的转录过程 转录的延伸 转录的起始 转录的终止 真核生物的RNA-pol借助于转录因子来辨认启动子及解开双螺旋。 真核生物的转录起始上游区段比原核生物多样化，转录起始时，RNA-pol不直接结合模板，其起始过程比原核生物复杂。 转录起始点 TATA盒 CAAT盒 GC盒 增强子 转录起始前的上游区段 AATAAA 切离加尾 转录终止点 修饰点 外显子 翻译起始点 内含子 OCT-1 OCT-1：ATTTGCAT八聚体 转录因子： 增强子：能增强基因转录的顺式作用元件，但没有启动子功能，存在位置不定。 反式作用因子(trans-acting factors)：能直接或间接辨认和结合顺式作用元件的蛋白质。 转录因子(trans-criptional factors, TF)：直接或间接结合RNA聚合酶的反式作用因子。 顺式作用元件：存在于转录起始前的上游区段，调控转录的DNA序列。 蛋白激酶，使CTD磷酸化 TFⅡH ATPase 57(?)，34(β) TFⅡE 解螺旋酶 30，74 TFⅡF 促进RNA-polⅡ定位于转录起点 33 TFⅡB 稳定ⅡD-DNA复合物 12，19，35 TFⅡA 辅助TBP-DNA结合 TAF 结合TATA盒 TBP，38 TFⅡD 功能 亚基和(或)分子量（kDa） 转录因子 真核生物RNA合成起始过程 真核生物转录起始时，首先由TFⅡD的TBP亚基识别并结合TATA盒，然后在其他转录因子的配合下，与RNA聚合酶Ⅱ组装形成转录起始前复合物(pre-initiation complex, PIC)。 TFIIH即能利用ATP的能量解开双螺旋。RNA Pol Ⅱ以其中一股为模板将NTP聚合成RNA。 RNA聚合酶Ⅱ的羧基末端结构域（CTD）被磷酸化修饰，大部分转录因子脱离，只保留TFⅡF与聚合酶结合向下游移动延伸RNA链。 （二）转录延长 真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，合成速度30-50nt/S，但速度不定，遇到G/C后，时间延迟。但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。 RNA-pol前移处处都遇上核小体，故在转录延长过程中可观察到核小体移位和解聚现象。 真核生物转录