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组织化学与细胞化学 南昌大学生命科学与食品工程学院 主讲：范丽华 目录 第一章 概 述 第二章 组织学的研究方法 第三章 光镜标本制作 第四章 光学显微技术 第五章 组织细胞化学 第六章 免疫组织细胞化学 第七章 原位杂交组织化学 第八章 细胞分离技术 第九章 细胞培养与组织工程 第十章 形态计量分析术 第一节　概述 1.组织与细胞化学 1.1定义： 组织化学(histochemistry) 与细胞化学（cytochemistry) 是运用物理学、化学、免疫学和分子生物学等原理与技 术，对组织与细胞的化学成分或酶活性进行定性、定位 和定量研究的科学。 ? 1.2 基本原理： 组织化学（histochemistry)和细胞化学（cytochemistry）技术的基本原理是在组织切片上或被检材料上，加一定试剂，使它与组织或细胞中待检物质发生化学反应成为有色沉淀物，以用光镜观察，若为重金属沉淀，可以用电镜观察，称电镜组织化学（electron microscope histochemistry)。这种方法可用于检测细胞内的酶类、糖类、脂类。核酸与某些金属元素等。如进一步应用显微分光光度计等测定标本中沉淀物的强度，则能较精确地进行定量研究。 2.研究组织、细胞传统的化学方法 传统的组织化学只是利用物理或化学反应显示组织或细胞内的化学成分或酶活性而对其进行定性、定位和定量研究。 3．现代意义的细胞与组织化学 包括无机物组织化学、酶组织化学、电镜细胞化学、荧光组织化学、免疫组织化学、同工酶组织化学、定量组织化学、原位杂交组织化学、放射自显影技术、流式细胞术和激光扫描共聚焦显微术等。故现代组织化学的概念已远远超过了原有的范围，理论、内容、技术手段和研究范围都比过去更广泛、更深入。包括经典组织化学、免疫组织化学和原位杂交组织化学在内的广义组织化学是介于细胞学、组织学、生物化学以及分子生物学之间的新兴边缘学科，已成为医学生物学科研工作的重要手段。定量组织化学技术主要用于组织化学的原位定量研究．是组织化学从定性、定位研究进入定量研究的重要手段。 细胞生物学发展与组织化学 细胞生物学是从细胞、亚细胞和分子三个水平研究生命活动规律的科学，组织化学以细胞生物学为基础发展而来。 显微镜的发明与细胞的发现将人类对机体的认识从宏观世界引向微观世界的广阔领域，由此人们从肉眼所见的大体结构开始探索光学显微镜下组织细胞的微细结构，正因为有了对机体微细结构的充分认识，才有可能产生对组织细胞的化学成分进行定性、定位和定量研究的渴求。然而，光学显微镜的分辨率有限，仅能观察到细胞膜、细胞质和细胞核，对于亚细胞结构，即超微结构的观察无能为力。 1932年，德国科学家Knoll和Ruska在西门子(Siemens)公司设计研制了世界上第一台透射电子显微镜。又把人类对机体的认识带入了超微结构领域。人们只有对机体结构深入了解。才可能透彻阐明其功能。著名生物学家Wilson的名言“一切生物学关键问题必须在细胞中寻找”，至今还有着很深的内涵。细胞生物学的发展历程为组织化学的产生和发展奠定了形态学基础。 免疫学发展与组织化学 18世纪70年代英国医生Edward Jenner研究出用牛痘菌预防天花的方法，为免疫学对传染病的预防开辟了广阔前景。 19世纪末．法国化学家、微生物学家Louis Pasteur在研究人和动物传染病时，分析了免疫现象，并在琴纳的启发下发明用减毒炭疽杆菌苗株制成疫苗，预防动物炭疽病，用减毒狂犬病毒株制成疫苗．预防人类狂犬病。德国细菌学家、免疫学家Emil Adolf von Behring于1890年发现免疫血清中有抗白喉毒素的抗毒素存在． 日本细菌学家北里柴三郎也发现抗破伤风毒素的抗毒素，两人共同研究血清疗法成功。从此，人们开始探词·免疫机制，把细胞的吞噬作用和抗毒素的中和作用看成是特异性免疫的根据，并逐步展开了细胞免疫和体液免疫两大学派的争鸣。体液免疫学派代表是德国细菌学家Ehrlich Paul。他用生物化学方法研究免疫现象。特别是以蛋白质化学和糖化学作为基础，探讨抗原和抗体的本质及其相互作用。于1896年提出抗体形成的侧链学说。 生物化学发展与组织化学 生物化学是一门运用化学原理及方法研究生命的科学。它一方面是进行细胞组成成分的化学分析，另一方面是对这些成分在生命过程中所发生的化学反应进行分析，而组织化学正是利用这些化学反应原理来实现对组织细胞化学成分的定性、定位和定量研究。 20世纪初，人类已经认识到组成蛋白质的20个标准氨基酸中的19种。E．Fi