溶血性试验.pptVIP

试验方法 方法 取 7 支试管，编号，按下表加入各种溶液。第 6 管不加入供试品， 方法 作为空白对照。第 7 管不加供试品并以蒸馏水代替生理盐水，作为完全溶血对 照。轻轻摇匀后置 37℃的水浴中保温，1h 后观察结果，再离心 5min 后观察结 果。 实验结果与统计 溶血性结果的评价 3、溶血性结果的评价 根据临床前和临床研究的结果，发现目前临床前体外溶血试验绝大多数为阴性结果，但临床应用过程中却有许多阳性结果的相关报道，即存在临床前和临床应用结果不一致的问题。因此，建议临床前研究中，在利用常规方法的同时，考虑结合其他的试验方法，特别是在长期毒性试验（静脉给药）中增加或关注相关指标的检查，以综合评价中药注射剂的溶血性，增加与临床人用结果相关性的认识。 * * 思考与讨论？. 实验现象 实验器材 实验原理 实验结果 试验方法 实验目的 溶血性试验 原理：溶血性试验是观察受试物是否引起溶血和红细胞凝聚等反应。 目的：某些中药注射剂，由于含有溶血成分或物理、化学及生物等方面的原因，在直接注入血管后可产生溶血作用；也有些注射剂中因含有杂质等成分，注入血管后可产生血细胞凝聚，引起血液循环功能障碍等不良反应；另外，因中药制剂的成分复杂，也存在因免疫反应引起的免疫性溶血。因此，凡是注射剂和可能引起免疫性溶血或非免疫性溶血反应的其他药物制剂均应进行溶血性试验。 探究：因造成溶血反应的机制复杂，目前尚无全面的临床前溶血试验方法。中药注射剂溶血性的测定,许多年来一直采用常规的体外溶血试验，即试管观察法（见附录）。它是通过肉眼来观察溶血情况，而有色泽中药注射剂对结果判断的影响较大，难以评价溶血程度。 为了精确检查中药注射剂的溶血性，建议在常规方法的基础上，结合以下或其他方法进行试验，如分光光度法、体外红细胞计数法、体内红细胞计数及分析法。这些方法与常规法比较，尽管前两者的操作相对复杂,影响因素较多，但当采用常规法测定的结果有疑问或必要时，采用计数法和分光光度法作为一种辅助方法,可帮助更精确的判断注射剂的溶血性。 在进行长期毒性试验中，应注意溶血性指标的观察（如红细胞数量及网织红细胞数的变化、胆红素、尿蛋白、肾炎、脾脏淤血及骨髓象等）。 当受试物出现体外溶血阳性结果时，应进行体内溶血性试验，不但可以判断是否存在药物诱发溶血性的可能，而且可以通过对其他指标的测定提供更多的信息，如网织红细胞是否增高、是否有血红蛋白尿、球形红细胞是否增多，以及骨髓检查是否有溶血性贫血现象等。 实验器材 动物 仪器试剂 家兔1只（供采血用） 小烧杯 竹签（去纤维蛋白用）,试管，试管架，吸管，恒温 水浴锅，离心机。 试剂 4%的桔梗煎液、生理盐水、蒸馏水 试验方法 步骤一；取兔血5-10ml加入洁净干燥的小烧杯中，用竹签或玻璃棒搅拌除去纤维蛋白元。 血球悬浮液的配置 步骤二；加生理盐水5-10ml，摇匀，离心，倾去上清液，如此反复几次，直至清液不出现血色为止。 步骤三；量取血球，加生理盐水稀释至2%的混悬液，供实验用。 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2%x血球混悬液 2.5 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 生理盐水ml 0 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 桔梗液ml 6 5 4 3 2 1 试管编号 试管 2%兔血混悬液（ml） 生理盐水（ml） 4%桔梗煎液(ml) 柴胡注射液（ml） 37℃保温 1h 后的结果 、2%兔血生理盐水混悬液的配制 10-20ml。用竹签搅拌以除去纤维蛋白 签搅拌以除去纤维蛋白 注：1） 2%兔血生理盐水混悬液的配制：取新鲜兔10-20ml。用竹签搅拌以除去纤维蛋白，然后吸 、2%兔血生理盐水混悬液的配 2ml， 摇匀即得。 取没有发生凝血和溶血现象的全血 2ml，加生理盐水稀释至 100ml 摇匀即得。 、4%的桔梗煎液： 4%的溶液 的溶液。 2） 4%的桔梗煎液：取桔梗 4g ，按普通煎煮法制成 4%的溶液。 、4%的桔梗煎液 结果判断依据： 完全溶血：溶液澄明，红色，管底无红细胞残留。 部分溶血：溶液澄明，红色或棕色，管底尚有少量红细胞残留。 不 溶 血：红细胞全部沉淀，上层液体物色澄明。 凝 集：虽不溶血，但出现红细胞凝集，经振瑶后不易分散或出现药物沉淀。