(生物分析法)核酸分子杂交技术.ppt

 核酸分子杂交技术 第 一 节 核酸分子杂交的基本原理 原理：碱基互补配对原则 一、核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization ) 来源不同的两条单链核酸分子通过碱基互补形成异源双螺旋分子，称为核酸分子杂交。 杂交可分成：DNA/DNA、RNA/RNA、DNA/RNA之间的杂交。 待测核酸序列 探针(probe)：已知核酸序列 二、DNA的变性(denaturation) 定义：在某些理化因素作用下，DNA双链解开 成两条单链的过程。 方法：过量酸、碱、加热、变性试剂如尿素、 甲酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等。 变性后其它理化性质变化： OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 例：变性引起紫外吸收值的改变 热变性 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 Tm=（G+C）%×0.41+69.3 三、DNA的复性 DNA复性(renaturation)的定义 在适当条件下，变性DNA的两条互补链可 恢复天然