生物工程制药讲课.ppt

等电聚焦实例--分离猪胸腺素蛋白质 →样品收集（挤出聚胶，取其中一根，用15%三氯醋酸固定4—5小时，然后用0.5考马斯蓝染色1.5小时，醋酸液中脱色作为参考。） →样品分离（其余各管对照相应的位置切成小段，置于蒸馏水中放置过夜，让蛋白质+两性载体共同洗出。然后经葡聚糖聚胶G-50柱，以15毫升/小时、1小时就可以分开两性载体和蛋白质。） 用鸡卵类粘蛋白作为配基纯化胰蛋白酶 →洗脱液每10毫升分部收集。→合并活力峰的洗脱液→冷冻干燥→各胰蛋白酶纯品 3.洗涤 收集树脂，用水冲洗至洗液澄清，滤干，用2倍量1.4mol/L NaCl，搅拌2h，滤干。 4.洗脱 用2倍量3mol/L NaCl搅拌洗脱8h，滤干，再用1倍量3mol/L NaCl搅拌洗脱2h，滤干 5.沉淀 合并滤液，加入等量95%乙醇沉淀过夜。收集沉淀，丙酮脱水，真空干燥的粗品 在0℃的条件下，搅拌加入等体积的 0.2mol/L的醋酸钠溶液，再加入1/4体积 的1%的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）。 0℃的条件下放置30分钟，离心得沉淀物。 沉淀物除糖原操作 （1）沉淀物溶解在含0.001mol/L的EDTA + 0.01mol/L的 醋酸钠溶液中，加入等体积的2.5mol/L的K2HPO4， （2）不断搅拌下再加入等体积的乙二醇甲醚， （3）在0℃的条件下，放置30分钟，离心，得上清液。 离心清液除蛋