《医学免疫学与免疫学技术》-ELISA解读.pptVIP

* 酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbsent Assay,ELISA） * 免疫标记技术将已知抗体或抗原标记上易示踪物质（如酶、荧光素、放射性同位素、胶体金等），通过检测标记物来反映有无抗原抗体反应，从而测出微量的抗原或抗体。 * 酶联免疫吸附试验原理利用标记技术将酶标记到抗体（抗原）上，使待检物中相应的抗原（抗体）与酶标记抗体（抗原）发生特异性反应。在遇到相应的酶底物时，酶分解底物，生成有颜色的产物。根据颜色的深浅,可以判断待检物中有无特异的抗原（抗体）以及量的多少。检测方法有直接法、间接法、双抗体法和抗原竞争法。 * 直接ELISA间接ELISA双抗体夹心法 包被(未知抗原） 加入酶标抗体 洗板 加底物 加终止液 包被(已知抗原） 加入待检标本 （未知抗体） 加入酶标第二抗体 ﹙抗抗体﹚ 洗板 加底物 加终止液 包被(已知抗体） 加入待检标本 （未知抗原） 加入酶标抗体 洗板 加底物 加终止液 原理示意图 * 人血清IgG抗体的检测——直接ELISA法 测定原理：将待检标本包被反应板，再加入酶标羊抗人IgG抗体。当标本中存在IgG时，该抗体与包被IgG结合，最后形成IgG-酶标羊抗人IgG抗体复合物，加入底物产生显色反应。 * 包被：用包被缓冲液将纯化抗体做10倍稀释，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml稀释液，4℃过夜。 加酶标