BLI 技术应用-新型生物制品快速定量技术—.pptxVIP

新型生物制品快速定量技术——BLI 技术应用China User Meeting2016-4-8陈涛Agenda直接定量法抓取定量法双抗夹心法（无信号放大）双抗夹心法（有信号放大）竞争法（无信号放大）竞争法（有信号放大）100%Relative Intensity0Wavelength (nm)使用BLI技术进行浓度定量传感器直接测定非标记分析物的结合！nm shift起始斜率与浓度呈正比。分析物测试在几分钟内完成。可以检测粗样品Time直接定量法 Initial slopeproA/proG/proL/AMQ/AHQ/GST/HIS---------------analyteIgG,GST/his tag或者做Customized biosensor:SA/AR2G 固化抗体检测浓度范围:0.1ug/ml-200ug/ml 重复性:5%再生次数（proA/proG/proL/AMQ/AHQ/GST/HIS）10 times；（SA/AR2G）视固化稳定性而定耗时:1-2 min/8 samples软件匹配:可以是否需要其他试剂:不 计算方法:起始斜率应用领域：蛋白，病毒的定量直接定量法举例----使用proA传感器定量hIgG 抓取定量法Initial slopeRegeneration，pH1.7 glycine---------antibody------analyteproA/proGProtein/virus定量范围:0.1ug/ml-500ug/ml 重复性:5%再生次数:10 times 时间:10 min/8 samples软件兼容性:yes需要的其他试剂:抗体或者受体 分析方法:initial slope应用:蛋白，疫苗类样品的快速定量 抓取定量法举例----某种病毒疫苗Lot 2Lot 1Step TypeAssay Time(s)solutionBaseline60Antibody bufferLoading30020ug/ml Ab(3ug/ml for 2Ga)Baseline60antigen bufferAssociation180antigen dilutions双抗夹心法（无信号放大）Regeneration，pH1.7 glycineR equilibriumproA biosensor---------Ab--------analyte-------HIgG block-------AbSA biosensor---------Ab--------analyte-------Abvirus/saccharide定量范围:0.001ug/ml-10ug/ml 重复性:5%再生次数10 times(not applied to SA biosensor)时间:15-20 min/8 samples软件是否匹配:yes分析方法:R equilibrium需要的其他试剂:one binding partner(virus/saccharide),two binding partner(monomer protein)应用:生物大分子的快速定量 双抗夹心法（无信号放大）举例----某种疫苗定量 vaccine bindingAb loadingHIgG blockAb binding20ug/ml20ug/ml2ug/ml2ug/ml0.2ug/ml0.2ug/ml0.02ug/ml0.02ug/ml0.002ug/ml0.002ug/ml双抗夹心法（有信号放大）R equilibriumSA biosensor---------Ab-----analyte-----2nd Ab-----enzyme---DABProtein/virus/saccharide定量范围:0.001ug/ml-1ug/ml 重复性:5-10%再生次数:no regenerable实验时间:30 min/8 samples软件是否匹配:yes分析方法:R equilibrium需要的其他试剂:one binding partner(virus/saccharide),two binding partner(monomer protein),Enzyme,DAB 应用:residual contamination,PK,diagnosis kit双抗夹心法（有信号放大）举例----CHO HCP kit竞争法（无信号放大）low concentrationAPS/AR2G---------analyte-----analyte mixed with AbHigh concentrationSmall molecule检测方位:1ng/ml-1000g/ml 重复性:5-10%再生能力:no regenerabl