发酵工程第5章发酵工业的种子制备.pptVIP

第一节 种子制备概述 （目的、要求、举例） 第二节 种子制备技术 第三节 影响种子质量的因素 第四节 种子质量的控制措施 级数愈少，愈利于简化工艺及控制，并可减少种子罐污染杂菌的机会，减少消毒及值班工作量，减少因种子罐生长异常而造成的发酵波动。 菌种生长速度，过快或过慢 与孢子质量及种子罐的培养条件有关 无菌空气温度较低或者培养基的质量较差 培养基灭菌后需取样测定其pH值，以判断培养基的灭菌质量 原材料质量 培养温度 湿度 通气与搅拌 原材料质量波动引起种子质量不稳定 原材料质量波动的主要原因：无机离子含量不同（微量元素Mg2+、Cu2+、Ba2+能刺激孢子的形成，磷含量太多或太少也会影响孢子的质量）。 温度过低，菌种生长发育缓慢 温度过高会使菌丝过早自溶 湿度低，孢子生长快； 湿度大，孢子生长慢 足够的通气量，以保证菌种代谢正常，提高种子的质量 搅拌可提高通气效果，促进生长繁殖，过度搅拌导致培养液大量涌泡，液膜表面的酶易氧化变性，泡沫过多增加染菌机会，增加能耗。 丝状微生物不宜剧烈搅拌。 对孢子的生产能力有较大影响 冷藏时间越长，生产能力下降越多 培养种子的目的： 扩大培养，增加细胞数量； 同时也必须培养出强壮、健康、活性高的细胞。为了使细胞迅速进行分裂或菌丝快速生长。 有较完全和丰富的营养物质，糖分少，需充足氮源和生长因子，无机氮源比例大； 各种营养物质的浓度不必太高； 供孢子用的种子培养基，可添加易被吸收利用的碳源和氮源； 应考虑与发酵培养基的主要成分相近。 选择最适种子培养pH的原则是获得最大比生长速率和适当的菌量 培养最后一级种子的培养基的pH应接近于发酵培养基的pH，以便种子能尽快适应新的环境 菌种稳定性的检查 测定其生产能力，从中挑选高产菌株，并及时对退化菌种进行复壮 提供适宜的生长环境 种子无杂菌检查，保证纯种发酵。 细菌发酵时的种子扩大培养； 细菌发酵过程中种子扩大培养的主要目的是为了获得大量的活力强的种子 ； 种龄对于生芽孢的种子尤其重要。若接种物含大量芽孢，将给后续发酵带来较长迟滞期 酿酒酵母的扩大培养 最初采用纯种进行酵母发酵并设计出酵母繁殖流程，他将每一步的接种量规定为10％，并控制繁殖条件与酿造时一致 现代的流程中，接种量为1%或更低，控制的条件也与酿造时不同。 丝状真菌既可以利用孢子，也可以利用菌丝体作为接种物接种到发酵罐进行发酵 在固化的培养基上产生孢子 “滚瓶”技术应用于产黄青霉的孢子生产 在固体培养基上产生孢子 在谷类的颗粒表面形成大量的孢子 在液体深层培养基中产生孢子 不能产生无性孢子的用繁殖体菌丝作为接种物，如生产赤霉素的菌种——藤仓赤霉 问题：难以获得均一的接种物 接种前将菌丝打成碎片，形成大量的菌丝段，它具有大量的生长点 斜面培养，制备孢子悬浮液作初级种子 可用培养摇瓶菌丝体作为初级种子 掌握有关无菌技术的基本概念 了解发酵工业污染的原因及其防治策略 掌握培养基及设备灭菌的基本原理、基本方法及灭菌时间的估算 实罐灭菌、连续灭菌定义，比较 掌握空气除菌基本原理、流程及空气预处理设计 种子异常分析 种子异常分析 菌丝结团 在液体培养条件下，繁殖的菌丝并不分散舒展而聚成团状称为菌丝团。菌丝聚集成团会影响菌的呼吸和对营养物质的吸收 种子液中的菌丝团较少，进入发酵罐后，在良好的条件下，可以逐渐消失，不会对发酵造成显著影响 菌丝团较多，种子液移入发酵罐后往往形成更多的菌丝团，影响发酵的正常进行。 种子异常分析 菌丝粘壁 菌丝粘壁是指在种子培养过程中，由于搅拌效果不好，泡沫过多以及种子罐装料系数过小等原因，使菌丝逐步粘附在管壁上，其结果使培养液中菌丝浓度减少，最后就可能形成菌丝团 以真菌为产生菌的种子培养过程中，发生菌丝粘壁的机会较多 第三节 影响种子质量的因素 斜面冷藏时间 培养基 pH 原材料质量 培 养 温 度 在制备土霉素生产种子过程中，高于37℃培养时，孢子接入发酵罐后表现出糖代谢变慢，氨 基氮回升提前，菌丝过早自溶，效价降低等现象。　　 湿度 　制备土霉素生产菌种龟裂链霉菌孢子时 发现，在含有少量水分的试管斜面培养基下 部孢子长得较好，而斜面上部由于水分迅速 蒸发呈干瘪状，孢子稀少。 通气与搅拌 斜面冷藏时间 　　链霉素生产中，斜面孢子在6℃冷藏两 个月后的发酵单位比冷藏一个月的降低18％， 比冷藏3个月的降低35％。 培养基 种子培养基特点 pH 第四节 种子质量的控制措施 种子液生化分析项目主要有：营养基质的消 耗速度、pH变化、溶氧变化、色泽和气味等 梭状芽孢杆菌发酵丁醇－丙酮时种子扩大培养的程序 举 例： 酵母发酵时的种子扩大培养 面包酵母时的种子扩大培养的程序 丝状真菌发酵的种子扩大培养 利用孢子