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2016-12-11 发布于重庆
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realtimePCR课件1(阅读).ppt

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实时定量PCR Real-time quantitative PCR Real time PCR的应用 mRNA表达的研究微小残留病变的检测肿瘤耐药基因表达的研究病毒感染的定量监测 Vs普通PCR，RTPCR的优势采用封闭的检测模式，因此扩增产物导致污染的可能性比普通PCR要小得多。扩增产物的检测在PCR扩增过程中同时进行，并且数据的采集、分析全部由仪器自动完成，因此整个检测所需的时间比普通PCR要节省许多。检测模式功能强大，具备定性、定量、突变、多项目等检测功能。而普通PCR要完成上述项目需采用不同的技术平台。进行定量检测时，其定量线性范围（5-6 logs）比普通PCR（2-3 logs）要宽得多。 Real-time定量PCR仪是在普通PCR 仪的基础上再配备一个激发光源和荧光信号检测系统的装置。通过PCR反应的数学函数关系，加入标准品，可以对待测样品中的目标基因进行准确定量。 Real Time PCR 热循环仪（PCR仪）荧光检测系统计算机及软件系统回顾： PCR基本原理 PCR是在试管中进行DNA复制反应，基本原理与体内相似在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶等存在的条件下，特异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应。基本步骤变性：加热使双链DNA变为单链退火：降温使引物和互补模板在局部形成杂交链延伸：耐热DNA聚合酶按5′→3′方向催化以引物为起始点的延伸反应示意图 * 2a. excitation filters 2b. emission filters 1. halogen tungsten lamp 4. sample plate 3. intensifier 5. ccd detector 350,000 pixels *