原生质体的培养与融合探讨.pptVIP

第十一章 原生质体的培养与融合 原生质体（Protoplast） 含义：去掉细胞壁的由质膜包裹、具有生活力的裸露细胞。 第一节 原生质体分离及纯化 一、原生质体分离 多数植物分离原生质体的经典材料-----叶肉细胞。 1、机械分离法（Machanical isolation） （2）酶液的配制 （3）分离原生质体 二、 原生质体纯化与活力测定 1、 离心沉淀法 原理：应用原生质体的比重大于溶液，离心后原生质体沉于底部。 步骤： 第一步原生质体溶液用400目网筛过滤。 第二步离心（500-1000r/min，离心5-6min）。 第三步吸去上清液，洗涤液重新悬浮，再离心沉淀。如此2-3次。 第四步用原生质体培养液洗1次，收集原生质体。 2、漂浮法 原理：应用渗透剂含量较高的洗涤液使原生质体漂浮在液体的表面。 步骤： 第一步：400目网筛过滤。 第二步：滤液和高渗溶液混合，离心。 第三步：小心吸取上层原生质体，洗涤液重复洗2-3次。 第四步：收集溶液表面原生质体，用培养液洗1次。 1、形态识别：形态上完整，呈圆形，含有饱满的细胞质，颜色鲜艳的即为存活的原生质体。 2、染色识别 1）0.1%酚番红染色：有活力的不被染色，死亡的被染上色。 2）0.025%Evans蓝染色：有活力但受损伤的细胞和死细胞能够摄取这种染料，活细胞不摄取 2）双醋酸盐荧光素(FDA)染色法：在荧光显微镜