“贺氏三通法”针刺不同时间介入对脑缺血再灌注大鼠模型血浆βEPACTH的影响.docVIP

“贺氏三通法”针刺不同时间介入对脑缺血再灌注大鼠模型血浆β-EP、ACTH的影响( 郭静1 张露芬2 刘红1 孙敬清1 马昕宇1 [摘要] 目的 观察“贺氏三通法”针刺不同时间介入对脑缺血再灌注模型大鼠血清血浆β-EP和ACTH含量变化的影响，探讨针刺对大鼠脑缺血再灌注后机体反应的调节机制。方法 采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉脑缺血再灌注模型，采用放射免疫法检测血清血浆β-EP和ACTH含量。结果 脑缺血再灌注大鼠血浆β-EP含量明显增高，而ACTH呈下降趋势，不同时间介入“贺氏三通法”针法治疗后血浆β-EP含量下降， ACTH含量增高，而且以3h介入治疗逆转β-EP与ACTH的比值失调更为明显。结论 “贺氏三通法”针法可以调节脑缺血再灌注大鼠β-EP与ACTH的比值失调，且以3小时介入效果最为理想。 [关键词] 贺氏三通法/针灸疗法；脑缺血再灌注；β-EP ；ACTH 贺普仁教授在50多年的医疗实践中，创立了“病多气滞，法用三通”的中医针灸病机学说和响誉海内外的针灸治疗体系——“贺氏三通法”。“贺氏三通法”即毫针微通，三棱针强通和艾灸、火针等温通三法。它在我国针灸界享有盛誉，具有显著的疗效和众多的适应症。应用于缺血性脑卒中各期疗效显著，临床疗效的验证及总结已在国家中医药管理局课题的支持下完成，经证实能显著提高脑卒中患者的疗效。本项实验研究以脑缺血再灌注模型作为研究对象，观察血浆β-内啡肽（β-endorphins，β-EP）和促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）含量的变化，旨从应激方面探讨“贺氏三通法”的作用机制。 1 材料与方法 1.1 实验动物及分组 健康成年SD大鼠，雄性，体重210-240g，清洁级动物，购自中国军事医学科学院动物中心医动字第005号。 采取随机抽签的方法将实验动物分为5组，分别为正常对照组（8只）、假手术组（8只）、模型对照组（8只）、针刺治疗组（24只）、药物治疗组（16只）。其中，根据介入治疗时间不同针刺治疗组又分为3h针刺组（8只）、6h针刺组（8只）、48h针刺组（8只），药物治疗组分为5h组药物（8只）、48h药物组（8只）。 正常对照组常规饲喂，不予处理；模型对照组造模后不予处理；假手术组除不插线外，其余处理同模型对照组；3h针刺组、6h针刺组和48h针刺组分别在在造模成功后3h、6h、48h开始介入针刺治疗，每日治疗一次，每次20分钟，即3h、6h针刺组共治疗3次，48h针刺组共治疗2次；5h药物组和48h药物组分别在造模成功后5h、48h后开始腹腔注射注射香丹注射液（按15ml/100g大鼠体重计算），每日一次，即 5h药物组共治疗3次，48h药物组共治疗2次。假手术组、模型对照组、针刺治疗及药物治疗各组均于造模成功后72h取材。 1.2模型制备及模型成功的标准 1.2.1 模型制备：参照Zea longa线栓法[1]制备模型。用10%水合氯醛（0.35ml/100g）腹腔注射麻醉后，仰卧固定，取颈正中切口，暴露右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）、结扎CCA近心端，双侧结扎ＥＣＡ及其分支，用动脉夹夹住ICA，在ＣＣＡ接近ICA和 ECA分叉处剪一约0.2ｍｍ的切口，将一长约4ｃｍ的烧好头的栓线由该切口插入ＣＣＡ后进入ＩＣＡ，直至颅底，越过大脑前动脉的起始部，到达大脑中动脉（MCA）的前部，长度约为2.0±0.4cm，阻断左侧大脑中动脉的血流。用庆大霉素消炎后封闭皮肤切口，切口外留1ｃｍ长的线端，以便将栓线拔出再灌注。造模2h后将线拔出，使大脑中动脉再灌注。 1.2.2模型成功的标准为:①对侧Hornor征；②提尾时对侧前肢内收屈曲；③爬行时向对侧倾倒或按顺时针方向转圈。模型不成功者均被剔除，随机补充，保证每组8只不变。 1.3 “贺氏三通法”治疗方法 1.3.1 取穴及针法： 取穴：百会、十宣、曲泽、委中，取穴及定位参见《实验针灸学》标准取穴[2]。 针法：3h针刺组、6h针刺组前2次治疗（即造模后36小时以内）以“贺氏三通法”之强通法，取上述诸穴三棱针放血，出血量至少一滴；3h针刺组、6h针刺组第3次治疗和48h针刺组（即造模后36小时以后）以“贺氏三通法”之温通法和微通法，上述诸穴以火针点刺后毫针留针治疗，留针20min，每日治疗一次,各组针刺的深度和强度均相同。最后一次治疗后2h取材。 1.3.2针具：神龙牌31号0.5、1、1.5寸针灸针，贺氏细火针、三棱针 1.4. 指标检测 1.4.1 标本采集：各组均在造模成功72h后取材。各组大鼠断头取血3mL，注入预先加好抗凝剂（EDTA50μL、抑肽酶40μL）的试管中，混匀，静置片刻低温离心（3000rpm，1