7细胞工程概论-st.pptVIP

使器官原基、一部分或整个器官在体外存活、生长，并保持其原有结构和功能的技术。 脾、骨髓及白细胞 在悬浮中生长良好，细胞圆形，单个或小细胞团 生存空间大，数量多，传代方便，易收获，可获稳定状态 生物技术上：生产各种生技术产品。狂犬病、小儿麻痹症等病毒疫苗、表皮生长因子、干扰素、白细胞介素等进行单克隆抗体制备。 科学研究上：病毒学、免疫学、遗传学、肿瘤学等。 临床医学上：胎儿的遗传性疾病分析，药物筛选及某些疾病的治疗等。 3.抑制细胞凋亡也称细胞程序性死亡，是指为维持内环境稳定，由基因控制的，细胞自主有序的死亡。 凋亡小体大小不等，有完整膜包裹的，内含胞质、细胞器及染色质片段的结构. 4.无血清培养基 (1)基础培养基 (2)生长因子和激素 (3)基质 （四）大规模细胞培养方法 1.悬浮培养系统细胞在培养液中呈悬浮状态生长和增殖的培养方法。 优点： ◆设备简单，成本低。 ◆容积可选择性大。 ◆可连续收集培养细胞和产物进行分析、传代。 ◆无须消化，防止细胞损伤。 ◆细胞浓度均一，产量恒定。 缺点： ◆震荡(避免沉降)。 ◆不断充气(细胞代谢和气体交换)。 ◆易产生气泡(添加抗泡沫剂)。 2.固定化培养 是细胞限制或定位于特定空间位置的培养技术。 吸附法：使细胞在适当条件下贴附在载体表面、中空纤维膜或容器表面的技术。 包埋法：将细胞包埋于多聚物等海绵状基质中进行培养的技术。 优点： ◆细胞可维持在较小体积培养液中生长。 ◆细胞生长密度较高。 ◆培养液易于更换。易进行实时分析。 3.气流驱动培养系统通过位于中心气流管底部的的喷射装置将混合气体注入容器，使培养物在容器中循环流动培养的技术。 优点： ◆简化设计，降低成本. ◆以气体为循环培养动力，防止机械搅拌损伤. 4.微载体培养系统细胞吸附于微载体表面，并借助于搅拌器作用，均匀悬浮于培养液中进行培养的技术 优点:扩大细胞附着表面积 缺点:微载体之间的相互聚集(蛋白水解酶和适当搅拌力) 5.灌注培养系统将细胞培养在能以相同速率自动替换培养液的容器中的技术. 优点: ◆可使细胞始终处于一个教 好的营养状态和生存环境. ◆可连续收集培养细胞所分 泌的产物. ◆可通过改变培养液的组成 实现对细胞状态的人为调 控. 缺点:设备复杂,需大量培养基质,细胞状态不稳,易污染.  1)研究对象是活细胞 2)研究条件可人为控制 3)样本可达到均一 4)便于观察、检测和记录 5)研究范围广泛 6)费用经济 1.细胞培养的优点 （五）细胞培养技术的应用 1)人工模拟条件与体内实际情况不完全相同。 2)长期生活在缺乏动态平衡的体外培养环境中,细胞特性将发生变化。 2.细胞培养的缺点 3.细胞培养意义 二、细胞融合也称体细胞杂交,指两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。（同核体，异核体） （二）细胞融合的基本原理 ◆基于酶缺陷型细胞和药物抗性建立筛选 ◆基于营养缺陷型细胞建立筛选 ◆由温度敏感型细胞组成的杂种细胞筛选 ◆具有所需性状的杂种细胞筛选 异核细胞：非同源细胞的融合体。 同核细胞：两个相同细胞的融合体。 多核细胞：含有双亲不同比例核物质的融合体。 2.细胞融合类型 根据融合细胞核的类型: 3.融合因素 仙台病毒 紫外线 丧失感染活性（不感染细胞） 保留融合活性（诱导细胞融合） 灭活的仙台病毒 新城鸡瘟病毒 疱疹病毒 聚乙二醇 4.细胞融合过程 2）诱导融合： 1）自然融合： (三)细胞融合方法 生物法:　 物理法: 化学法: 优点:打破了细胞融合的种属屏障。 缺点: 病毒制备困难、操作复杂、灭活病毒的效价差异。 1.生物法(仙台病毒法) 利用灭活病毒特性促进细胞融合的方法. 步骤： ★两细胞在病毒黏结作用下彼此靠近； ★病毒作用细胞膜,使两细胞膜及胞质互相渗透； ★两细胞核互相融合，细胞融为一体； ★细胞正常分裂成含有两种染色体的杂种细胞。 2.物理法 利用物理条件促进细胞融合的方法. 步 骤 细胞膜接触→膜击穿→膜融合 * * 细 胞 工 程 Cell Engineering 一、细胞工程在现代生物技术中的地位 1.生物技术应用生命科学及工程学的原理和技术，对生物进行控制和改造，以实现人类特殊需求的综合性技术。 第一节 概 述 基因工程 蛋白质工程 酶工程 发酵工程 染色体工程 细胞工程 2.生物技术的研究领域 基因工程在分子水平上，用人工方法提取、合成或重组不同生物的遗传物质，并通过载体把重组分子引入受体细胞，使其复制与表达,最终实现商业价值的技术。 基因工程基本过程 转化子筛选 载体选择 目的基因提取 体外DNA重组 引入受体细胞 重组DNA检测 蛋白质工程蛋白质工程就是在对蛋白质结构与功能认识基础上，对蛋白质进行人工改造与合成，最终获得