菌种师教材总结.doc

目录 岗位名称：菌种师 单元一 无菌操作技术 模块1 灭菌技术 ●干热灭菌 ●湿热灭菌 ●过滤除菌 ●化学药品灭菌 ●射线灭菌 模块2 无菌操作技术 ●斜面接种 ●液体接种 ●穿刺接种 ●平板接种 单元二 菌种的扩大培养 模块1 培养基的制备 ●设计培养基的配方 ●培养基的制备 模块2 菌种的扩大培养 ●孢子的制备 ●种子的制备 ●酵母菌的扩大培养 单元三 菌种复壮与保藏 模块1 菌种的复壮 ●纯种分离 ●通过寄主复壮 ●淘汰已衰退的个体 单元一 无菌操作技术 模块1灭菌技术 ● 干热灭菌法 Ⅰ 灼烧灭菌主要用于实验室接种针接种环试管口和玻璃棒等的灭菌电热干燥箱电热干燥箱电热干燥箱要专人看管切勿同时干其它事情以免发生事故电热干燥箱电热干燥箱灭菌后的物品放置室温的物品放置蒸气灭菌器或蒸笼30min。 3、灭菌后的物品放置室温后的物品放置室温后的物品放置室温可达到完全灭菌的目的一次30只能杀死微生物的繁殖体真菌的孢子和细菌的部分芽孢而不能杀死所有芽孢当把第一次后的物品放置室温下时物品上残存的芽孢即可萌发变成繁殖体繁殖体对热力的抵抗力远远弱于芽孢的抵抗力因此当第二次时又可杀死芽孢形成的繁殖体这样进行三次即可达到完全灭菌的目的高压蒸气灭菌要有专人负责每次灭菌前，应检查安全阀的性能是否良好，以防锅内压力过高，发生爆炸。各种培养基溶液玻璃器皿金属器械工作服橡胶用品等均可用高压灭菌器灭菌瓶装液体灭菌时，要用玻璃纸和纱布包扎瓶口，如用橡皮塞的，应插入针头排气妨碍蒸气需要灭菌的各种包裹不应过大、过紧，一般应小于55cm33cm×22cm。 ■ 有些灭菌包，包内和包外各贴一条灭菌指示带（长约6～8cm），如压力达到15时，指示纸带上即出现黑色条纹，表示已达灭菌的要求。已灭菌的物品应做记号，以便识别，并需与未灭菌的物品分开放置，以免弄错重金属盐类对微生物均有毒害作用这是由于金属离子容易与微生物的蛋白质结合而发生变性或沉淀或与某些酶的巯基结合使酶失活氧化剂作用于微生物的蛋白质结构中的氨基羟基或其他化学基团造成代谢机能障碍而死亡酚的杀菌可能是对菌体细胞膜有损害作用和促使菌体蛋白质凝固所造成醇的杀菌作用主要是由于它具有脱水作用使菌体蛋白质脱水而变性醛的杀菌作用在于它具有还原作用能与蛋白质的氨基酸结合而使蛋白质变性表面活性剂的杀菌作用在于它能吸附在微生物细胞的表面使细胞壁的通透性改变促使细胞内的物质排出接种箱接种前用记号笔在距试管口23cm位置上，注明菌名、接种日期等。将管放于手。用火焰烧红，然后将接种环来回通过火焰次。用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。将试管口在火焰上微烧一周将烧过的接种环伸入菌种管内，先将环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却以免烫死菌体，然后用环在菌苔上轻轻地接触，刮下少许培养物，并将接种环慢慢的从试管中抽出，并迅速地伸入另一试管中，在斜面上划线（波浪或直线），使菌体沾附在培养基上。将生长好的菌种用牛皮纸包好置4℃冰箱中保存倒平板制备稀释液涂布培养基冷却至60℃时混匀后倒平板制备稀释液涂布上述平板培养基底面标记稀释度然后用无菌吸管从稀释度吸取0.1ml对号放入平板玻涂棒培养高氏I号和查氏培养倒置于培养箱中28培养35d，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37培养12d。 ■ 玻璃涂棒制备：用直径3～5mm、长约20cm的普通玻璃棒，在喷灯火焰上把一端弯成“了”形或Y形。 ■ 菌种的分离纯化方法。 Ⅱ平板划线法 【总操作程序】 主要分5个步骤，融化培养基→倒平板培养基冷却至5560℃时混匀后倒平板培养趁热用四层纱布过滤还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌普通培养基为12120min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。用滴管逐滴加边搅动边用精密的H试纸测其H值直到符合要求时为止H值也可用H计来测加塞时棉塞总长度的3/5应在口内2/5应在口外棉塞要松紧适度既要紧贴内壁而不留缝隙以防空气中微生物侵入又要不过紧使之能起到过滤空气的作用理想的松紧程度以手提棉塞时瓶管不落为合适要选用纤维较长一般不用脱脂棉作棉塞因为它容易吸水变湿造成污染而且价格也较贵在微生物实验或科研工作中常常要用到通气塞所谓的通气塞就是用几层纱布(一般是六至八层)做成的通气性能更加良好的塞子通气塞加在装有液体培养基的三角烧瓶瓶口上放在摇床上进行振荡培养可获得更多的氧气来促进菌体生长或进行发酵一方面阻止外界微生物进入培养基内防止由此而引起的污染另一方面保证优良通气性能使微生物能不断地获得无菌空气因此棉塞质量的好坏对实验的结果有着很大的影响一只好的棉塞外形与未开伞的蘑菇相似其大小松紧都应适当28±1℃。部分菌种为30℃或37℃左右，培养时间因菌种不同而异，一般在4