Kerne 喹诺酮说明书(2014-1-7).docVIP

Kernel?喹诺酮酶联免疫反应试剂盒说明书 (货号：EVFQS-01) 1．概述 Kernel? 喹诺酮酶联免疫反应测试盒是用于检测鸡蛋、鱼/虾、鸡肉/猪肉、牛奶、血清/尿液、蜂蜜等样品中喹诺酮的残留量。该试剂盒特点包括： 高回收率（80%），快速（10-40分钟），多种样品低成本提取方法。 高灵敏度（0.3ng/g或ppb）。 快速的ELISA检测方法（只需不到90分钟）。 高重现性。 2．试剂盒原理 Kernel? 喹诺酮酶联免疫反应测试盒基于竞争性酶联反应原理，含有喹诺酮的药物抗原已经包被于微孔板上，在分析时，样品中药物特异性地与抗体相结合。如果药品中有药物存在，它将阻止包被于微孔板上的药物与抗体结合。当与样品药物相结合的药物抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，与经酶标记物相结合。反应后颜色深度与样品中喹诺酮的含量成反比。 3.试剂盒组成部分和储存 内容物 规格 保存 喹诺酮包被板 96孔板（12×8 孔） 2-8℃ 喹诺酮标准品： 0ng/ml阴性质控 0.3ng/mL 1.1ng/mL 3.3ng/mL 0.8mL 0.8mL 0.8mL 0.8mL 0.8mL 2-8℃ 10ng/mL 30ng/mL 0.8mL 回收用1000ng/ml 0.8mL 200×HRP酶结合物 0.1mL 2-8℃ 10×浓缩洗液(Wash Solution) 50mL 2-8℃ 终止液(Stop Buffer) 12mL 2-8℃ TMB底物(TMB Substrate) 12mL 2-8℃ 10x样品提取液 50ml 2-8℃ 4.样品检测下限 检测物质 检测下限（ppb） 鸡蛋 3 鱼/虾 3 鸡肉/猪肉 3 牛奶 1.5 血清/尿液 1.5 蜂蜜 6 5.交叉反应 分析物 交叉反应 (%) 恩诺沙星(Enrofloxacin) 100 环丙沙星(Ciprofloxacin) 100 沙拉沙星(Sarafloxacin) 100 二氟沙星(Difloxacin) 100 诺氟沙星(Norfloxacin) 143 恶喹酸(Oxolenic acid) 112 吡哌酸(Pipemidic acid) 102 氧氟沙星(Ofloxacin) 97 达氟沙星(Danofloxacin) 73 氟甲喹（Flumequine） 62 西诺沙星（Cinoxacin） 5 6．未提供的设备或材料 酶标仪(450nm) 匀质器 漩涡振荡器 微量加样器(10、20、100和1000(L各一支) 多道枪：50-300(L 甲醇 7.注意事项 实验前请阅读以下文字，以保证获得最佳实验效果。 标准品中含有喹诺酮，请小心使用。 不要使用过期的试剂盒。 不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。确保酶结合物及酶结合物稀释液正确配制。 尽量保持室温（22.5±2.5）°C，避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发。在孵育期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。 水质量很重要，确保使用蒸馏或者去离子水。 加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。 从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质量的风险。 将微孔板置于放有干燥剂的密封袋中，冷藏保存。 8．样品的制备 样品保存在2-4℃不超过1-2天，如果需要保存较长的时间，应该放置-20℃。样品使用前应恢复到室温。 1×样品提取液：1(10×样品提取液)：9(蒸馏水) 35%甲醇/样品提取液 混合6.5体积1×样品提取液和3.5体积100%甲醇。举例：取35ml 100%甲醇加入到65ml 1X样品提取液中，配制成100ml的35%甲醇/样品提取液，按需要，可同比例放大或缩小。 70%甲醇 按7：3的比例配制无水甲醇和双蒸馏水。举例：取70ml无水甲醇加入到30ml双蒸馏水中，配制成100ml的70%甲醇。按需要，可同比例放大或缩小。 鸡蛋 称取1g鸡蛋样品，加入4mL的70%甲醇。 最大速度涡旋振荡2分钟。 室温（22.5±2.5）°C下4000g离心5分钟。 移取0.5mL上清液到离心管中，加入0.5mL的1×样品提取液，混匀。 取50uL处理好的样品液用于分析。 稀释倍数：10.0 鱼/ 虾 去除样品中的脂肪，对样品进行匀质； 取1.0g匀质样品，加入4mL70%甲醇； 最大速度涡旋震荡10分钟； 室温（22.5±2.5）°C下4000g离心5分钟； 移取0.5mL上清液，加入0.5mL1×样品提取液，混合