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Western Blot试验 2014-05-07?医学生学术（MSA） Western印迹要想做的好，当然每个步骤都不能马虎。 一、配胶 这些小孔的孔径随 “双丙烯酰胺～丙烯酰胺” 比率的增加而变小，比率接近 1：20 时孔径达到最小值。SDS聚丙烯酰胺凝胶大多按“双丙烯酰胺～丙烯酰胺”为1：29 配制，试验表明它能分离大小相差只有3% 的蛋白质。 分离胶及浓缩胶均可事先配好(除AP及TEMED外)，过滤后作为储存液避光存放于4 ℃，可至少存放1个月，临用前取出室温平衡(否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡，有条件者可真空抽吸3分钟)，加入10%AP(0.7~0.8:100, 分离胶浓度越高AP浓度越低，15%的分离胶可用到0.5:100)及TEMED(分离胶用0.4:1000, 15%的可用到0.3:1000，浓缩胶用0.8：1000) PAGE配胶的试剂和配方比例对电泳结果的质量当然有决定性的影响，这个配胶的比例，在《分子克隆》上有详细的论述，相信大家都不难查到。容易忽视的问题主要在于过硫酸铵(AP)一定要新鲜——最好用小指管配AP(写日期)保存在-20度，超过2周的AP扔掉算了，或者已经反复打开使用多次的AP都别用， 灌入2/3的分离胶后应立即封胶，胶浓度10%时可用0.1%的SDS封，浓度10%时用水饱和的异丁醇或异戊醇，也可以用