sur1过表达实验设计方小案.docxVIP

下载本文档

15
0
约9.27千字
约 11页
2016-12-13 发布于湖南
举报
版权申诉

sur1过表达实验设计方小案.docx

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

SUR1过表达实验设计方案一实验目的：使SUR1基因在植物体内超表达二实验方法：三实验步骤RT-PCR将RNA反转录成CDNARNA提取（-70℃保存）组织剪碎加入1ml Trizol，冰上匀浆（边匀浆边暂停）转入一新EP管中（1.5ml），室温保存5min加氯仿0.2ml，振荡混合（手摇剧烈），室温放置5min10000 rpm 4℃离心15min转移上层水相（吸70%）到一新EP管中，加异丙醇0.5ml,振荡混合，室温保存10min12000rpm 4℃ 离心15min倒掉上清，加1ml 75%无水乙醇（4℃保存），振荡混合，10000rpm 4℃ 离心5min倒掉上清，室温或37℃放置20min(EP管倒置在滤纸上)使RNA沉淀干燥加20ul DEPC水至EP管中在60℃孵育3-5min(或手握3-5min),使RNA充分溶解逆转录以Fernentas试剂盒为例，反应体系20ulRNA短暂离心将11ul的DEPC水和RNA（1ug）放入EP管内，置于冰上，使RNA终浓度为0.5ug/ul,再加入Oligo(dt) 1ul,轻轻混合均匀，短时间离心(RNA=1/总RNA浓度=1/ OD260×6 ；DEPC水=11-RNA)将反应液置于65℃ 5min 冰上1min,短时间离心按顺序加入：5×buffer4ul200ul核糖核苷酸酶抑制剂1ul 10mm dNTP MIX2ul M-Mulu逆转录酶1ul 轻轻混合均匀，短时间离心将混合物置于42℃，60min70℃加热5min,中止上述反应，置于冰上据序列设计引物对CDNA进行PCR扩增在TAIR上查出SUR1的序列1 ATGAGCGAAG AACAACCACA CGCCAATCTA GCGGTTCCCG CGTTTAAAAC 51 TGAGAAAGAG CCCATAACGC AAACACGAAA TGGTCAAAGT AGCGTTTGGC 101 GTTTCGGTGG AAGTGATAAG GCAGCGAAAG CATCCACCGT AACGCTTAGA 151 GGTGTCATCT ACATGCTCTT CGACAACTGC GGCAAAGACG TCAATAAGAC 201 CATTTTACCC CTCGGCCACG GTGACCCTTC CGTCTACCCT TGCTTCCGTA 251 CCTGTATCGA AGCTGAAGAC GCCGTCGTCG ACGTCCTTCG CTCCGGCAAA 301 GGCAATTCTT ACGGTCCCGG AGCTGGGATT CTCCCCGCAA GACGAGCCGT 351 TGCTGATTAT ATGAACCGAG ATCTTCCGCA CAAGTTAACG CCTGAAGATA 401 TTTTTCTGAC CGCTGGATGC AACCAAGGGA TAGAGATCGT GTTCGAATCG 451 TTGGCTCGAC CAAACGCAAA CATCTTGCTC CCACGTCCTG GCTTCCCTCA 501 CTACGACGCT CGTGCTGCTT ACAGTGGTCT CGAGGTTCGC AAGTTTGATC 551 TTCTTCCCGA GAAAGAATGG GAGATTGATC TTGAAGGTAT CGAAGCCATT 601 GCAGACGAGA ACACTGTGGC TATGGTTGTA ATTAACCCCA ACAATCCCTG 651 TGGAAATGTC TACTCTCACG ACCATCTCAA AAAGGTTGCA GAGACGGCTA 701 GGAAGCTCGG GATAATGGTG ATCTCAGACG AAGTATATGA CCGAACTATA 751 TTCGGAGACA ATCCATTTGT TTCAATGGGG AAGTTTGCTT CGATAGTCCC 801 TGTATTGACA CTAGCAGGCA TATCTAAGGG ATGGGTTGTT CCTGGATGGA 851 AAATTGGCTG GATCGCCTTG AATGATCCCG AGGGCGTTTT CGAGACCACC 901 AAGGTGTTAC AATCCATCAA ACAGAATCTT GACGTAACTC CTGACCCTGC 951 CACAATAATT CAGGCTGCAC TTCCAGCGAT CCTGGAGAAA GCGGACAAAA1001 ACTTCTTTGC AAAGAAGAAC AAGATACTCA AACATAATGT TGATTTGGTG1051 TGTGATAGGC TCAAGGACAT CCCCTGTGTC GTCTGTCCCA AGAAACCTGA1101 GTC