《细胞工程》第5章细胞融合与单克隆抗体技术2(阅读).pptVIP

细胞工程 Chapter5、细胞融合与单克隆抗体技术 5．1 细胞融合技术 5．1．1 细胞融合现象 5．1．2 细胞融合技术 5．1．3 动物杂交细胞的筛选及其遗传表型的控制 5．2 单克隆抗体技术 5．2．1 杂交瘤技术的基本原理 5．2．2 单克隆抗体的特性 5．2．3 单克隆抗体的制备 5．1 细胞融合技术 5．1．1细胞融合现象 一、细胞融合（cell fusion）： 是指两个或多个真核细胞合并成为一个 双核或多核细胞的生物学现象和过程。 二、细胞融合过程分四个阶段： 细胞接触 细胞质膜的融合 细胞质 重组 遗传物质的选择 三、细胞融合的分类： ●基因型相同的细胞融合，形成的双核或多核细 胞，称同核体（homokaryon）； 短期死亡； ●不同基因型的细胞融合 形成的双核或多核细胞， 有丝分裂 双亲染色体 称异核体（杂种细胞） 融合 分裂成二 合核体（synkaryon） （也称单核杂种细胞） 5．1．2 细胞融合技术 一、细胞融合技术： 是指通过物理化学和生物方法 人为地将两个不同来源的细胞融合 产生目的杂种细胞的工程技术过程。 二、细胞融合的发生： 自然界存在很多细胞融合现象，如： 受精、成肌细胞融合，但频率低； 细胞内吞与外排也属细胞膜融合现象； 细胞内膜系统物质运输过程等。 三、细胞融合技术分类： 动物细胞融合 细胞 细胞融合 人为方法 构建 植物细胞 自然融合 技术 原生质体融合 细胞拆合—人为方法，人为组合 四、融合促成法 ——加速细胞融合的方法 ●物理法——电融合诱导法： 20世纪，80年代，直流电脉冲，膜电位 改变，质膜破裂、融合，融合率高，重复 性强，损伤小，易观察、控制；（见图） ● 化学法 NaNO3诱导法——中和细胞表面负电荷，促进聚集； 高Ca2+和pH诱导法——改变膜电位； PEG诱导——聚乙二醇（卡波蜡，Carbowax），分 子量200～20000，1000，为液体， 1000，为固体；醚键联结，分子末端 带负电荷，1974年，对大麦、大豆原生 质体融合；（见图） 高Ca2+和pH诱导PEG结合诱导法：提高100～300 倍，融合率高，PEG浓度3～5%最佳， 毒性小，可靠质量，来源方便，常用； ● 生物法 ——用仙台病毒（sendal virus，也称 日本血凝病毒HVJ，属副流感类群）， 20世纪，60年代，日本，冈田（Okada） 发现，原因是各种细胞均有其受体，病毒 膜碎片还有融合功能，主要是53000糖蛋 白的作用。 五、不同细胞融合的条件及其主要应用 5．1．3 动物杂交细胞的筛选及其遗传表型的控制 ●采用动物细胞融合技术诱导细胞融合后，形 成由亲本细胞同核体及异核体组成的细胞混合 群体。不同的细胞在体外培养条件下有着不同 的生长特性。在未融合的亲本细胞中，缺乏增 殖能力的终端分化亲本细胞，往往在短期培养 后死亡，无限传代或部分有限世代的亲本细胞 保持原有生长特性，往往能较快地适应培养条 件而成为优势生长的细胞群； ●由于杂交细胞在融合处理后的细胞群体中数量少，生长缓慢，往往受到优势生长的亲本细胞抑制，需要筛选； ●杂交细胞在体外培养过程中，可能因为基因的丢失或突变，使其原有的遗传表型消失或减弱，应定期检测杂交细胞遗传表现型，进行控制。 一、杂交细胞的筛选： ●杂交细胞筛选可根据不同细胞 生理、生化特性，设计具体的筛 选方案和选择体系，优先选择杂 交细胞； 二、杂交细胞表型及其控制：