(一)人工诱导多倍体的原理与方法 多数贝类卵子在排放时一般停止在第一次减数分裂的前期或中期,在受精后或经激活后再完成减数分裂,释放出两个极体。通过人为处理阻止其第一极体或第二极体放出,就可形成三倍体 1.物理法 温度休克 通过温度的变化影响和干预细胞的正常分裂,达到染色体加倍的目的? 静水压处理 抑制纺锤体的微丝和微管的形成,阻止染色体的移动,从而抑制细胞的分裂,形成多倍体。 电脉冲 2.化学法 ?细胞松弛素B(CB) CB特异性破坏微丝,导致细胞分裂中由微丝构成的收缩环解体,抑制细胞质分裂,阻止极体的释放,从而产生多倍体。CB是一种致癌剂 ?6—二甲基氨基嘌呤(6—DMAP) 抑制蛋白质磷酸化,通过作用于特定的酶,破坏微管的的聚合中心,使微管不能形成,从而抑制极体的形成和释放。6—DMAP是一种非致癌性,具水活性。 咖啡因 其提高细胞内的Ca2+,使微管二聚体的解聚,阻止细胞分裂,从而形成多倍体。? 3.生物法 四倍体能与二倍体杂交产生l00%的三倍体,这在太平洋牡蛎中已得到证实。因此,同源四倍体贝类的培育技术已成为目前多倍体研究的热点之一;四倍体与二倍体杂交、方法简便,能高效、稳定地生产三倍体,是实现三倍体产业化的最佳途径。但迄今为止只在太平洋牡蛎、贻贝等少数贝类中诱导出可成活的四倍体,对其它贝类诱导出成活四倍体的难度很大、而同源四倍体的繁殖能力如何,能否建立稳定的四
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