12.23号生理实验-超氧阴离子.pptVIP

植物超氧阴离子自由基含量的测定 一、原理 02—能与羟胺溶液反应生成N02—： NH20H+202—+H+=N02—+H202+H20 N02—+经对氨基苯磺酸和α-萘胺显色反应生成对苯磺酸-偶氮-α-萘胺(红色)，该红色产物在530nm有专一吸收峰。根据N02—显色反应的标准曲线将A530换算成N02—的浓度，再根据反应式直接进行02—化学计量，得出02—的浓度。 二、仪器设备 分光光度计、高速冷冻离心机、10ml离心管、研钵、恒温水浴锅等。 三、试剂 （1)65mmo1/L 磷酸缓冲液pH7.8 （Na2HPO4:10.69g+KH2PO4:0.9078g/L） ; (2)17mmol／L对一氨基苯磺酸：称2.94g对氨基苯磺酸，加25ml浓盐酸溶解蒸馏水定容到1000 ml; (3)7mmol／L α一萘胺：1.0g α一萘胺，加25mi冰醋酸溶解，蒸馏水定容到1000ml (4)10mmol／L盐酸羟胺: 0.695g/L (分子量69.45) (5)亚硝酸钠标准液：称NaN02(AR级)0.1000g，蒸馏水定容至100ml，摇匀,取5ml用蒸馏水定容到1000ml，即为每毫升含N02— 5μg的标准液。 四、材料 小麦叶片、黑麦草叶片、小白菜、小青菜、荠菜 等 五、方法步骤 1、标准曲线的制作：取7支大小一致