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释放度方法学验证试验相关学习 1．5 释放量测定方法：释放量的测定，即已释放入介质中药物的定量测定，其技术要求应符合测定药物含量的一般原则。常用的方法有UV法和HPLC法。方法学验证过程中除常规考虑外，尚应关注：主药在释放介质中的稳定性；最佳取样量，以保证测定简便，尽量减小误差；滤器的性质，考证有效成分在滤器上是否有吸附。 化学药物口服缓释制剂药学研究技术指导原则（二OO七年九月） 溶出度测定方法的验证与含量测定相同，包括： 准确度（回收率）、精密度、专属性（辅料、胶囊壳等的干扰试验）、线性和耐用性等 中国药典附录XIX A药品质量标准分析方法验证指导原则 采用UV法测定前，一定要进行紫外扫描，以考察辅料是否存在干扰。方法为：分别取对照品溶液和供试品溶液（浓度最好与对照品溶液一致或略低），进行紫外扫描。 干扰试验（专属性试验）： 着重观察供试品溶液图谱情况：是否存在基线被抬升的现象，以及与对照品溶液图谱重合的情况。如辅料无干扰，则供试品溶液图谱应与对照品溶液图谱基本重合或整体略低于对照品图谱；如辅料有干扰，就会出现基线或末端吸收处被抬高的现象。 另一方法可采用HPLC法，将其测定结果与UV法进行比较，以判定辅料是否有干扰。 辅料干扰如不超过2%，可勉强接受。 测定干扰2%以下可忽略不计，2～5%可考虑在限度上适当提高，超过5%以上测定方法不可取，如是空胶囊产生的应进行囊壳的消除试验 当辅料干扰紫外法测定时，通常可采用以下方法： (1) 双波长吸收度差值法：寻找到辅料吸收度值相等的两个波长，其中的一个波长应为主成分的最大吸收波长。以对照品溶液和供试品溶液分别在此两波长处的吸收度值差值进行计算。此法在日本应用较为普遍，在进口质量标准中也有部分品种使用，方法简便、易行，值得推广。但采用本法的前提是“辅料的吸收应呈平行 线”；如呈“斜坡形” 则应折中考虑，当误差大于2%（可用回收率来衡量），仍建议采用HPLC法测定 (2) 导数光谱法：通过对图谱进行一阶或二阶的求导处理，以去除辅料对主成分测定的干扰。由于此法受仪器的限制和求导后导数值较小，给测定带来较大误差。同时，随着HPLC仪器的不断普及，目前已很少使用。 (3) HPLC法：在HPLC色谱柱上可轻松将辅料与主成分分离，该法测定最为准确、可靠，只是工作量略显增加。 释放介质的制备：称取氯化钠9.0g，加水适量溶解并稀释至1000ml，摇匀，即得。 50mg规格空白辅料溶液的制备：取50mg规格处方量辅料（约相当于去甲文拉法辛28mg），置50ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置20ml量瓶中，用释放介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 100mg规格空白辅料溶液的制备：取100mg处方量辅料（约相当于去甲文拉法辛56mg），置50ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置20ml量瓶中，用释放介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 50mg规格供试品溶液的制备：取50mg规格琥珀酸去甲文拉法辛缓释片样品（批号：131016）适量，精密称定，研细，取本品细粉适量（约相当于琥珀酸去甲文拉法辛28mg），置50ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2ml，置20ml量瓶中，用释放介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 100mg规格供试品溶液的制备：取100mg规格琥珀酸去甲文拉法辛缓释片样品（批号：131012）适量，精密称定，研细，取本品细粉适量（约相当于琥珀酸去甲文拉法辛56mg），置50ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2ml，置20ml量瓶中，用释放介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 检测：精密量取上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。 琥珀酸去甲文拉法辛-专属性试验 琥珀酸去甲文拉法辛-专属性试验 结论：由图可知，释放介质及空白辅料在该色谱条件下对本品释放度检查无干扰，说明该方法专属性良好。 发生吸附的品种往往是主药均难溶于水 微粉化，原料药粒径变小，比表面能变大，静电吸附能力增强，故与滤膜的吸附作用明显； 一些小规格制剂，主药浓度低，达到饱和所需的初滤液体积大大增加，干扰也较大 滤膜被溶出介质溶解，产生浊度，吸收升高 过滤中操作：产生气泡等 一般认为吸附量在2%以下时可忽略不计，超过2%建议或在质量标准中明确注明滤膜规格或滤膜预处理方法（如煮沸1.5 h）、增加初滤液量（常规为5ml）或规定样品高速离心后取上清液测定。 滤膜吸附试验： 中国药典溶出度测定法对微孔滤膜的规定为“滤孔应不大于0.8μm，并使用惰性材料制成的滤器，以免吸附活性成分或干扰分析测定”。工作中常用滤膜有水系和有