09转基因动物与生物反应器-HXY幻灯片.pptVIP

（3）体外重组 选择好目的基因和启动子调控元件后进行体外重组，构建融合基因。 （4）基因转导 将构建好的重组基因用基因转导方法转移到受精卵。 （5）胚胎移植 利用胚胎移植技术将制备的转基因受精卵植入待孕母体子宫内，生产转基因动物，得到转基因乳腺表达个体。通过采集转基因动物的乳汁,来获得目的基因表达产物。 （6）鉴定 转基因动物乳腺生物反应器可以从分子水平和乳腺分泌物两个方面进行鉴定。 2. 动物乳腺生物反应器的优点 产品质量稳定 产品成本低 研制开发周期短 无污染 经济效益显著　 3. 动物乳腺生物反应器的应用 高乳汁营养价值 生产药用蛋白 患有庞普病的婴儿体内一种可促进糖原质代谢的酶有缺陷。 荷兰研究人员培育出一种转基因兔，兔奶中表达这种酶，因此饮用这种奶可以治疗这种疾病。 4. 动物乳腺生物反应器存在的问题 （1）外源基因在动物体内的位点整合问题 （2）乳蛋白基因表达组织特异性问题 （3）目的蛋白的翻译后修饰问题 （4）转基因表达产物的分离和纯化问题 （5）转基因的技术与方法问题 （6）伦理道德问题 动物 多肽药物 用途 绵羊 a1抗胰蛋白酶蛋白 治疗气肿 绵羊 CFTR 治疗 囊肿性纤维化 绵羊 组织型纤溶酶原活化因子 治疗血栓 绵羊 凝血VIII因子、IX因子 治疗血友病 绵羊 纤维蛋白原 伤口愈合 猪 组织型纤溶酶原活化因子 治疗血栓 猪 凝血VIII因子、IX因子 治疗血友病 山羊 人蛋白质 C 治疗血栓 山羊 抗血栓因子 3 治疗血栓 山羊 谷氨酸脱羧酶 治疗I型糖尿病 山羊 Pro542 治疗爱滋 病 牛 a-乳清白蛋白 抗炎症 牛 凝血VIII因子 治疗血友病 牛 纤维蛋白原 伤口愈合 牛 胶原蛋白 I, II 组织修复, 治疗风湿性关节炎 牛 乳铁蛋白 治疗肠道感染, 感染性关节炎 牛 人血清白蛋白 维护血液体积 鸡, 牛, 山羊 单克隆抗体 用于疫苗生产 前 景 转基因动物制药（乳腺生物反应器）是21世纪生物医药产业的一种新的药物生产模式。 美国红十字会预测：到2010年，转基因动物生产的商品将达到350 亿美元的销售额，生产的药物将占整个基因工程药物的90%以上。 研究展望 转基因技术是近年发展很迅速的一项新技术，尚有许多问题存在，有待进一步完善，但是该技术在医学和药学等领域有着广阔的应用前景，相信转基因动物研究将极大的推动医药科学的发展。 携带人血清白蛋白基因的转基因试管牛“滔滔” 著名科学家谈家桢院士（左）、著名老中医徐蔚霖教授与曾溢滔院士在转基因牛“滔滔”模型前留影 Korea： Production of transgenic cloned pigs transgenic cloned pigs with the green fluorescent protein(GFP) on June 8, 2003. 转基因鸡 美国公司研制出可当宠物出售的转基因荧光鱼 转基因花菜棉羊  鸡冠花公鸡头变异 小老鼠猕猴桃绿色血 思考题 简介转基因哺乳动物的制备方法 简介转基因动物技术的应用 胚胎干细胞法建立转基因鼠的实验程序 与传统育种方法相比较，ES细胞在生产转基因动物方面表现其独特的优势： （1）打破了物种的界限，突破了亲缘关系的限制，加快了动物群体遗传变异程度； （2）可以进行定向变异和育种，利用同源重组技术对ES细胞进行遗传操作，通过细胞核移植生产遗传修饰性动物，有可能创造新的物种； （3）利用ES细胞技术，可在细胞水平对胚胎进行早期选择，这样可以提高选择的准确性，缩短育种时间。近年来的研究表明，利用ES细胞生产转基因动物在动物生产中发挥着极为重要的作用。 4 精子载体法 直接用精子作为外源DNA载体的转移方法。 主要问题：重复性不好 精子与外源DNA结合的机理 精子直接与外源DNA混合培养，外源基因可以直接进入精子头部，受精后就可发育成转基因动物。 后来Rottman对此方法进行了改进，将外源DNA在与精子共孵育之前用脂质体包埋，使脂质体与DNA相互作用形成脂质体——DNA复合物。这种复合体比较容易和精子细胞融合，从而进入细胞内。 5 YAC介导的基因转移 酵母人工染色体（YAC）载体是近年来发展的新型载体，具有克隆百万碱基对的大片段外源DNA能力。 流程：ES转染YAC后体外筛选→阳性ES细胞囊胚腔注射，或YAC原核微注射 突出的优点：保证大片段基因的完整性 6 细胞核移植技术 将体细胞移植技术(克隆动物)与转基因技术结合，使转基因的群体能迅速被克隆扩大，还能保证目的基因在克隆后代中的稳定表达。 优点：后代100%全是转基因个体，可以选择后代性别，转基因