第六章 酶子修饰.pptVIP

Chapter 6 Modification of Enzyme Molecule 第五章 酶的分子修饰 锄折毒堑埃赴卒昼副锈件乏讼震榷抽腰璃很禁西线卧狭烹整狄拴误者剧汝第六章 酶分子修饰第六章 酶分子修饰 6.1 什么是酶分子修饰？ 通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的催化特性的技术过程称为酶分子修饰。 即：在体外将酶分子通过人工的方法与一些化学基团（物质），特别是具有生物相容性的物质，进行共价连接，从而改变酶的结构和性质。 帐肌减弥扬云敢辑素柬滑煽宦寂诉牵饥途戈败寄醇然臃祈株岭念稀铁签颖第六章 酶分子修饰第六章 酶分子修饰 酶分子修饰的意义 提高酶的活力 activity 增强酶的稳定性 stability 降低或消除酶的抗原性 immunological property 改变底物的专一性substrate specificity 研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子和各种物理因素对酶分子空间构象的影响 structure 乎吵淆增凄孽桌蹋莽畜天且啮牡厂钡涅便丰霖应哥毁猩会掠箕率荚梭骡研第六章 酶分子修饰第六章 酶分子修饰 6.2 酶分子修饰的基本要求和条件 对酶分子进行修饰必须在修饰原理、修饰剂和反应条件的选择以及酶学性质等方面都要有足够的了解。 （1）酶的稳定性 热稳定性、酸碱稳定性、作用温度、pH、抑制剂等。 （2）酶活性中心的状况 活性中心基团、辅因子等。其他如分子大小、性状、亚基数等。 杉骏饥徐榷宗秋忽畅张窍招仑擂子党广待搁春亦豫邦烟魂夏问援爵清缺啸第六章 酶分子修饰第六章 酶分子修饰 酶分子修饰的条件 修饰反应尽可能在酶稳定条件下进行，并尽量不破坏酶活性功能的必需基团，使修饰率高，同时酶的活力回收高。 （1）pH与离子强度 pH决定了酶蛋白分子中反应基团的解离状态。由于它们的解离状态不同，反应性能也不同。 （2）修饰反应的温度与时间 严格控制温度和时间可以减少以至消除一些非专一性的修饰反应。 （3）反应体系中酶与修饰剂的比例 搓吏凸炭粥坯酋幂往镜乡陵宣删放梳荫斩利亭惩卡札扑盔综胸宦杰抽膳地第六章 酶分子修饰第六章 酶分子修饰 6.3 酶分子的修饰方法 金属离子置换修饰, 大分子结合修饰(共价/非共价) 侧链基团修饰 肽链有限水解修饰 氨基酸置换修饰 酶分子的物理修饰 帮变趾龟妇到久翼勘怨俊一秦娱饮棱届敞震默舜列聋作魏克买服珠得客怨第六章 酶分子修饰第六章 酶分子修饰 (1) 酶的金属离子置换修饰 把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性和功能发生改变的修饰方法称为金属离子置换修饰 置换修饰的目的： 阐明金属离子对酶催化作用的影响 提高酶的催化效率 增强酶的稳定性 改变酶的动力学特征 允衷混以遂撇泼眼趋百曲雇权幢汰蔚疾恰兹他李芜肌临昭咸戮塌赶沾蒜言第六章 酶分子修饰第六章 酶分子修饰 金属离子置换修饰的过程 a. 酶的分离纯化 b. 除去原有的金属离子 c. 加入置换离子 金属离子置换修饰只适用于那些在分子结构中本来含有金属离子的酶。 用于金属离子置换修饰的金属离子，一般都是二价金属离子。 绷幽晤犬攻风纷顿尚共炯牺能舷奈衡椎鳃触勋榆骨带宪嚼瞥逻疯酋赢爆涉第六章 酶分子修饰第六章 酶分子修饰 (2) 酶的大分子修饰 采用水溶性大分子与酶的侧链基团共价结合，使酶分子的空间构象发生改变,从而改变酶的催化特性的方法。 目的： 提高酶催化效率 增强稳定性 降低或消除酶蛋白的抗原性 舷晰执秘尸讳擦幼野侗渊咕瘪径丰酬跋邵额尸饮牧就谭凹或炙秀核垣压例第六章 酶分子修饰第六章 酶分子修饰 大分子修饰(共价)的过程 修饰剂的选择 修饰剂的活化 修饰 分离 毙陶谈沥盲晋契罩冬阁赖颜树锯哉回庞或萎拈腋诀打睹牧咒庇祁睡屿渝殆第六章 酶分子修饰第六章 酶分子修饰 聚乙二醇是线性分子具有良好的生物相容性和水溶性，在体内无毒性、无残留、无免疫原性，并可消除酶的抗原性，使其末端活化后可以与酶产生交联，因而，它被广泛用于酶的修饰。 酶 天然SOD 右旋糖酐-SOD Ficoll(低分子量)–SOD Ficoll(高分子量)–SOD 聚乙二醇-SOD 半衰期 6 min 7 h 14 h 24 h 35 h 相对稳定性 1 70 140 240 350 捂愧迁孝仁鞍姻领巍分戎泞滞汾逛赢慈赌庐紊霹蹿徘珠泰斌耪讲放爆映昔第六章 酶分子修饰第六章 酶分子修饰 (3) 酶分子的侧链基团修饰 采用一定的方法（一般为化学法）使酶蛋白的侧链基团发生改变，从而改变酶分子的特性和功能的修饰方法，称为侧链基团修饰。 作用： 研究酶的分子结构与功能 测定某一种基团的