免疫毒性及评价_培训课件.pptVIP

2010.6 免疫毒性及其评价 * （二）毒性反应复杂性 2.反应呈双相性 同一外源性化学物质在不同的染毒方式下（染毒剂量、途径及检测时间等）对机体免疫可产生免疫抑制或免疫增强两种效应， 例如：在抗原致敏前后给实验动物腹腔注射镉，对动物抗体生成细胞（PFC）分别产生促进及抑制效应。 2010.6 免疫毒性及其评价 * 　外源性化学物质免疫毒性的检测 2010.6 免疫毒性及其评价 * 一、免疫毒性检测方法 （一）免疫病理学检查 （二）免疫功能评价 （三）超敏反应与自身免疫反应的检测 2010.6 免疫毒性及其评价 * 观察试验动物免疫器官（胸腺、骨髓、脾脏、和淋巴结）的大体形态、脏器系数，常规染色后进行组织病理学检查。 （一）免疫病理学检查 2010.6 免疫毒性及其评价 * （一）免疫病理学检查 1.观察免疫器官的大体形态、大小/重量 和脏器系数。 2. 组织病理学检查 3. 检测淋巴细胞表面标记 2010.6 免疫毒性及其评价 * 荧光激活细胞分类仪（fluorescence activated cell sotor, FACS）是用于流式细胞术的一种自动分析仪器，它将高度特异性的单克隆抗体与流式细胞术结合在一起 。 目前用这种技术对T、B淋巴细胞、NK等细胞及T淋巴细胞亚群即T辅助细胞（Th）及T抑制细胞（Ts）之比进行检测。 检测淋巴细胞表面标记 2010.6 免疫毒性及其评价 * 荧光激活细胞分类仪（fluorescence activated cell sotor, FACS）是用于流式细胞术的一种自动分析仪器，它将高度特异性的单克隆抗体与流式细胞术结合在一起 。 2010.6 免疫毒性及其评价 * 因此T淋巴细胞亚群的检测对控制这些疾病的发生、发展、了解发病机制、指导临床治疗都有极其重要的理论意义和临床意义，它已成为临床检验的一项重要指标。 2010.6 免疫毒性及其评价 * 常用的三种方法： （1）淋巴细胞增殖试验 （2）细胞毒性T细胞杀伤试验（CTL ） （3）迟发型超敏反应试验（DTH） 3. 细胞免疫功能评价 2010.6 免疫毒性及其评价 * （1）淋巴细胞增殖试验 淋巴细胞在体外经丝裂原刺激后可发生增殖，是检测B淋巴细胞和T淋巴细胞功能的一个重要方法。 常用的丝裂原有： 植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）主要刺激T淋巴细胞； 金黄色葡萄球菌（SAE）、大肠杆菌脂多糖（LPS）主要刺激B淋巴细胞。 2010.6 免疫毒性及其评价 * （1）淋巴细胞增殖试验 观察淋巴细胞增殖的方法主要有： ①形态学方法 ②放射性核素掺入法 ③比色法 2010.6 免疫毒性及其评价 * ①形态学方法 T淋巴细胞在体外经有丝分裂原（植物血凝素，PHA）或特异性抗原刺激后，可发生由小淋巴细胞转变成体积较大、代谢旺盛，并能进行分裂的淋巴母细胞。母细胞化过程中可产生一系列变化如细胞变大、细胞浆扩大，出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等。通过母细胞转化率，可以了解机体的细胞免疫状态。 形态学方法简便易行，便于基层实验室推广采用，但判读结果受主观因素影响较大。 2010.6 免疫毒性及其评价 * 原理： 淋巴细胞在体外经丝裂原刺激后可发生增殖，是检测B淋巴细胞和T淋巴细胞功能的一个重要方法。 淋巴细胞增殖试验 2010.6 免疫毒性及其评价 * ②放射性核素掺入法 原理 T淋巴细胞在丝裂原刺激下发生增殖，DNA和RNA合成明显增加，如在培养液中加入3H－胸腺嘧啶核苷（3H－TdR），通过其掺入到淋巴细胞DNA合成的量来判断淋巴细胞增殖的程度。 2010.6 免疫毒性及其评价 * ②放射性核素掺入法 方法评注 该方法是一种检测淋巴细胞增殖客观、灵敏的方法，但需有较昂贵的液体闪烁仪，并有同位素污染的问题，在应用上有一定困难。在整个实验中应避免同位素污染。 2010.6 免疫毒性及其评价 * ③比色法 颜色反应法（MTT 法） T淋巴细胞经丝裂原刺激后，发生增殖，在细胞培养68h后加入MTT 增殖细胞通过线粒体水解酶将MTT 分解为兰紫色结晶被称作甲臢（formazan）,根据颜色深浅来判断细胞的增殖。 MTT： 3 (4,5 –dimethy1-thiazo1-zyl) 2.5-diphenyl tetrazolium bromide)，四甲基偶氮唑盐 2010.6 免疫毒性及其评价 * ③比色法 方法评注： 这些有颜色的产物可在ELISA仪或721分光光度计上测定，根据颜色深浅判断淋巴细胞转化程度。该方法简便、快速、可直接在分光光度计上测定，无放射性污染，在对一定数量细胞测定时，具有与同位素参入法同样的灵敏度。 2010.6 免疫毒性及其评价 * （二）WHO推