“无症状”淋球菌感染的机制探讨_培训课件.ppt

* * 目的 选择了有症状组和无症状组的非独特NG-MAST 亚型各3种菌株，进一步研究孕激素在这些淋球菌野生株引起的中性粒细胞炎症反应的调节作用，探讨其作用差异及信号转导的可能机制。 方法 分离人外周血中性粒细胞（PMNs），检测PMNs上PR的表达： 在孕激素作用的不同时段检测iNOS, eNOS,TNF-a 和IL-1β的mRNA变化，测定iNOS、eNOS、Akt和p-Akt (Ser473)蛋白水平，比较分析其差异。 * * * * * * 结果 我们通过RT-PCR和免疫荧光的方法发现人的外周中性粒细胞并不表达经典的PR受体；孕激素能抑制iNOS, TNF-a 和IL-1β 的mRNA表达，在有症状组Ngo ST2951、ST735、ST436 和无症状组ST809、ST369、ST2948中并没有显著差别；孕激素显著下调了iNOS蛋白的表达水平，然而eNOS蛋白没有检测到显著的改变；在孕激素处理前后没有能观察到磷酸化的Akt蛋白，总的Akt也没有改变。 结论 孕激素的压力导致PMNs中加剧iNOS表达的抑制和PMNs前炎症因子的下调，而这种作用是不依赖于PR介导受体途径和akt信号通路。 * * 第四部分 孕激素体外调节Ngo-PMNs呼吸爆发、凋亡应答的机制研究 * * 目的 研究孕激素体外调节淋球菌引起的中性粒细胞呼吸爆发和凋亡的作用。 方法 分离人外周血中性粒细胞，分别用孕激素和十字孢碱处理，十字孢碱作为阳性对照。在0，3，8，12小时等时段用荧光定量RT-PCR分别测定各组中性粒细胞中凋亡抑制蛋白cIAP2和XIAP 的表达水平；同时用流式细胞仪检测PMNs凋亡，用鲁米诺化学发光法检测淋球菌ST2951株刺激PMNs后呼吸爆发。 * * Figure 1 Effect of progesterone on expressions of IAPs were analyzed by real-time PCR. * * Table 1 Progesterone delayed the onset of apoptosis in Ngo challenged PMNs. * * Figure?2 Annexin V-FITC ? PI method for detection of apoptosis in Ngo challenged PMNs at 12h. * * Figure 3 Chemiluminescence. Adherent PMN were challenged in the presence of luminol with staurosporine (●) or with progesterone(▲), Medium+ST2951 (○) were used as a negative control. Chemiluminescence readings were taken every 5 min for 1 h. * * 结果 cIAP2在孕激素处理3h后显著上调而XIAP和ST2951+medium组相比上调轻微；cIAP2在十字孢碱组是下调的。此外，我们发现孕激素对淋球菌ST2951刺激后的中性粒细胞有明显的延迟凋亡作用，尤其是在12h的时候；10ng/mL的孕激素对中性粒细胞的呼吸爆发并没有显著的影响，而十字孢碱加强了淋球菌刺激后中性粒细胞超氧负离子的产生。 结论 孕激素对淋球菌引起的中性粒细胞炎症反应有很重要的调节作用，孕激素介导的延迟感染了淋球菌的中性粒细胞凋亡可能是其逃避天然免疫和建立女性生殖道长期的低水平感染的重要机制，可能在女性无症状感染中起重要作用。 * * 进一步研究 性激素作用元件通过哪些信号传导途径调控Th2、Th17细胞因子的合成，其调控位点突变是否影响中性粒细胞的趋化及淋球菌黏膜免疫功能的改变； 2. 在小鼠淋球菌感染模型中性激素是如何通过Opa-CEACAMs 分子通路调控Th2、Th17免疫细胞，引起黏膜免疫功能的改变。 * * 华中科技大学 同济医学院 附属协和医院 皮肤性病科 * 谢谢各位! Thank you for your attention! hongxiangchen@ 微信号：patrickwb * 武汉协和医院 陈宏翔 武汉协和医院 陈宏翔 武汉协和医院 陈宏翔 武汉协和医院 陈宏翔 武汉协和医院 陈宏翔 武汉协和医院 陈宏翔 武汉协和医院 陈宏翔 武汉协和医院 陈宏翔 武汉协和医院 陈宏翔 武汉协和医院 陈宏翔 武汉协和医院 陈宏翔 武汉