第3代BiFC载体.docVIP

PAGE PAGE 1 第三代BiFC （目的基因可以连接到YFPN/C上游或下游） 在YFPN和YFPC的5’和3’ 端都有多克隆位点MCS（1， 2， 3）, 可根据需要把目的基因装在适合的位置。如果目的基因的结合域在靠近N端，可优先考虑接在YFP的5’端；如果目的基因的结合域在靠近C端，可优先考虑接在YFP的 使用两组不可逆重组LoxP突变位点（LoxP1L/1R、Lox2L/2R）把2个表达盒整合在一个质粒（LoxP1L只能与LoxP1R不可逆重组；LoxP2L只能与LoxP2R不可逆重组），可以大大提高2个表达盒的共转化效率。 在NOS终止子末端EcoRI位点旁增加I-SceI位点。 NE1L2L TCT AGA GTT AAC CGG GCT CAG GCC TGG CGC GCC ACT AGT GGA TCC ATC GAT AGT MCS1Xba I Hpa I Stu I Asc I Spe I BamH I Cla I MCS1 ACT GTC GAC CTC GAG GGT ACC GCT CCC GGG ATG GAG CAA AAG TTG ATT TCT GAG Sal I Xho I KpnI /Acc65 I Xma I