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HPLC检测饮料中食品添加剂 摘要：本报告建立同时检测食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠3种食品添加剂的高效液相色谱分析方法。3种食品添加剂在16min内达到基线分离。在0.02~0.32mg/mL范围内线性关系良好，相关线性系数R2为0.99995~0.99997。同时应用高效液相色谱法对橙汁、碳酸饮料中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的含量进行检测，检测快速，结果准确可靠。 实验部分： 1. 仪器 仪器：LabTech LC600 高效液相色谱仪 色谱柱：LabTech Kromasil C18 （250×4.6mm i.d.5.0μm） 2. 药品及试剂： 食品添加剂标准品（山梨酸、苯甲酸、糖精钠）：1.00mg/mL，国家标准物质中心 甲醇：色谱纯 乙酸铵溶液：取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL，经微孔滤膜过滤 氨水（1+1）：氨水与水等体积混合 3. 实验内容 3.1. 标准溶液制备 取山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准原液，浓度均为1.00mg/mL。 混合标准使用液：分别准确吸取不同体积山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准原液，将其稀释为山梨酸、苯甲酸、糖精钠含量分别为0.000mg/mL、0.020mg/mL、0.040mg/mL、0.080mg/mL、0.160mg/mL、0.320mg/mL的混合标准使用液。 3.2. 液体样品前处理：橙汁、碳酸饮料液体样品：称取10g样品（精确至0.001g）于25mL容量瓶中，用氨水（1+1）调节pH至近中性，用水定容至刻度，混匀，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。各样品均3次平行实验。 3.3. 色谱条件： 流动相： 纯甲醇+（20mmol/L乙酸铵水溶液）=5:95 流速： 1.0 mL/min 色谱柱： LabTech C18 柱， 4.6mm*250mm，5μm 检测波长：230nm 进样量： 10μL 柱温： 35℃ 3.4. 测定 取混合标准使用液和样品处理液各10μL注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据定性，以其峰面积求出样液中被测物质含量，供计算。 4. 实验结果 4.1. 3种食品添加剂的分离分析 根据实验条件3.3分离分析3种食品添加剂标准品，图1为山梨酸、苯甲酸、糖精钠标准溶液（0.04mg/mL）分析色谱图，根据出峰时间判断药品依次为苯甲酸、山梨酸、糖精钠，理论塔板数均达到14000以上。 图1： 苯甲酸、山梨酸、糖精钠（0.04mg/mL）高效液相色谱图 序号 名称 保留时间（min） 浓度(mg/mL) 峰分离度R 1 苯甲酸 9.455 0.04 10.90 2 山梨酸 13.790 0.04 4.14 3 糖精钠 15.850 0.04 0.00 4.2. 标准曲线的绘制 将浓度分别为0.000mg/mL、0.020mg/mL、0.040mg/mL、0.080mg/mL、0.160mg/mL、0.320mg/mL的混合标准使用液，按3.3的色谱条件，各吸取10μL进样分析，根据各组分的响应峰面积与相应的质量浓度进行线性回归，绘制标准曲线，相关线性系数均达到0.99995以上。各组分曲线线性关系和相关系数见下表。 表1 苯甲酸、山梨酸、糖精钠线性方程及相关系数（n=6） 食品添加剂 线性范围（mg/mL） 线性方程 相关系数R2 苯甲酸 0.000-0.320 Y=3.032e+4+2.931e+7X 0.999952 山梨酸 0.000-0.320 Y=6.1e+4+5.894e+7X 0.999952 糖精钠 0.000-0.320 Y=3663+1.959e+7X 0.999970 ????????????? 苯甲酸标准曲线图 山梨酸标准曲线图 糖精钠标准曲线图 图2 苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准品标准曲线 4.3 样品分析结果 4.3.1将实验3.2处理好的橙汁液体样品根据条件3.3进行分析,样品检测平行三次1#、2#、3#，分别重复进样三次，样品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠检测浓度及样品中含量的计算值见下表。 表2 橙汁中苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量 样品浓度计算 1#浓度(mg/mL) 2#浓度(mg/mL) 3#浓度(mg/mL) 平均浓度(mg/mL) 样品含量（mg/g） 苯甲酸 0.0002 0.0004 0.0002 0.0003 0.00075 山梨酸 0 0.0002 0.0002 0.0001 0.00025 糖精钠 0 0.0001 0 0 0 4.3.