第三章酶-2013.ppt

* * * * * * 1．固定化酶是固相酶 固定化酶（immobilized enzyme）是将水溶性酶经物理或化学方法处理后，成为不溶于水但仍具有酶活性的酶衍生物。 固定化酶在催化反应中以固相状态作用于底物，并保持酶的高度特异性和催化的高效率。 2．抗体酶是具有酶活性的抗体 将底物的过渡态类似物作为抗原，注入动物体内产生抗体，则抗体在结构上与过渡态类似物互相适应并可相互结合。该抗体便具有能催化该过渡态反应的酶活性。当抗体和底物结合时，就可使底物转变为过渡态进而发生催化反应。 这种具有催化功能的抗体分子称为抗体酶(abzyme)。 作业：阅读以下文献并回答问题: How do Enzymes Works？ 1、Kraut, J. How do Enzymes Works? Science,242:533-540; 2、Schultz，P.G., The Interplay Between Chemistry and Biology in the Design of Enzymatic Catalysts, Science,240:426-433,1988 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * National Center for Biotechnology Information / 酶的分离纯化和活力测定 酶分离纯化方法与蛋白质分离纯化的方法大致相同。 材料的选择：选择酶含量高的新鲜组织低温提取。 胞外酶：细胞内产生后分泌到细胞外发挥作用。不需要破坏细胞。 胞内酶：不分泌到细胞外。需要破碎细胞。 酶分析的一般程序 材料选择-------组织捣碎-------抽提-------沉淀-------透析-------粗酶-------纯化-------分离-------确定分子量---------活性测定 酶的活力与测定 酶催化一种化学反应的能力。 大小：在一定条件下酶催化某一化学反应的速度来表示。 反应速度：单位时间内底物的减少量或产物的生成量。由于反应体系中底物的浓度往往是过量的，而产物则从无到有，因此一般用产物的生成量来表示。 酶活力单位： 国际单位（I.U.）（生物化学学会酶学委员会） 1961年，一国际单位是指在最适条件下，每分钟催化1μmol底物减少或产物生成所需要的酶量。如果底物中有一个以上的可被作用的基团或键，则一个国际单位是指每分钟催化1μmol的有关的键或基团需要的酶量，温度一般规定为25℃。 1972：Katal,Kat-每秒钟催化1mol/L的底物转化为产物所需的酶量定义为1Kat。 1Kat=6×107 I.U. 比活力/比活性：每毫克酶蛋白所具有的活力单位数。－－－纯度指标。 转换数：酶被底物完全饱和时，单位时间内单位酶或活性中心所能够转换的底物分子数，也称为酶的分子活性。 Vmax =K3 [Et] 转换数K3=Vmax/[Et] 酶活力测定的一般方法 测定酶活力的方法： 终点法和动力学方法 终点法：测定完成一定量反应所需要的时间，如淀粉酶 动力学方法：测定一定时间内所发生的化学反应量 产物量测定：比色法、量气法、滴定法、分光光度法、放射测量法、酶偶联分析 第五节 酶的分类和命名 一、酶的命名（英文 ”-ase”） 1961年国际生物化学联合会酶学委员会（EC） 1、习惯命名法 依据： （1）催化底物：蛋白酶、淀粉酶、核酸酶、脂酶etc. （2）催化反应性质：脱氢酶、转氨酶、脱羧酶etc. （3）底物＋性质：琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶etc. （4）外加其他特征：胃蛋白酶、碱性磷酸酶 酶——具有生物催化功能的蛋白质或核酸。 酶作为生物催化剂具有高效性、高度专一性、催化活性可以被调控和易受环境因子的影响等特点。 高效性：酶催化比无催化反应的速率高108～1020倍。比非酶催化剂高107～1013。 过氧化氢分解 铁催化 速度6×10－4（mol/mol催化剂.S） 过氧化氢酶 催化速度6×106（mol/mol催化剂.S） 酶的分类——国际酶学委员会根据催化反应类型，将酶分为6大类，即氧化还原酶类、转移酶类、水解酶类、裂合酶类、异构酶类和连接酶类。分别用1~6来表示，在根据底物中被作用的基团或键分为亚类，每一亚类在细分为亚亚类等，亚类和亚亚类均按顺序编成1，2，3，4等。每一个酶的分类编号由4个数字组成，数字间用“.”隔开，编号前冠以EC(Enzyme Commision)。 Enzyme classes (six) 根据底物或反应命名后缀 “ase” ATPase 水解 AT