乳酸菌生长最佳培养基的筛选.doc

乳酸菌生长最佳培养基的筛选 摘要：文中通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数、菌落大小及溶钙圈大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基。实验表明,在添加胡萝卜汁的乳酸菌分离固体培养基上,乳酸菌生长最好,活菌数含量最高,菌落和溶钙圈最大。同种培养基,半固体培养较固体培养更适于乳酸菌生长,前者出菌快,活菌数多。 关键词：乳酸菌 固体培养基 半固体培养基 菌落 乳酸菌是有益于人体健康的益生菌,主要存在于人体肠道,其有助于宿主调整正常菌群,维持肠道微生态环境的平衡。乳酸菌的代谢产物能降低肠道内的pH值,抑制肠道中腐败菌的生长和减弱腐败菌在肠道的产毒作用,并有帮助消化、防止便秘,防止细胞老化,降低胆固醇,抗肿瘤以及调节人体生理机能等保健和医疗作用[1-5]。在食品向天然型、功能型发展的今天,乳酸菌制品正愈来愈受到人们的重视,通过检测乳酸菌在不同固体和半固体培养基中的菌落数,菌落和溶钙圈的大小,以筛选出乳酸菌生长的最佳培养基,用于乳酸菌制品的研究与开发 一、材料及方法 111菌种及来源 保加利亚乳杆菌(lactobacillusbulgaricus),由西北农业大学微生物室提供。(以下简称乳酸菌)。 112培养基 11211固体培养基的筛选 RJP培养基(1号):牛肉膏3g;蛋白胨3g;酵母膏3g;乳糖20g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH610。LAB培养基(2号):牛肉膏10g;酵母膏10g;乳糖20g;琼脂15g;吐温80110ml;CaCO310g;KH2PO42g;蒸馏水950ml;pH616。214号培养基(3号):牛肉膏3g,胰胨10g;NaCl5g;酵母膏6g;葡萄糖2g;半胱氨酸013g;琼脂15g;蒸馏水1000ml;pH714~715 乳酸菌分离培养基(4号):牛肉膏1g;蛋白胨1g;酵母膏1g;葡萄糖1g;蕃茄汁20%;吐温800105%;CaCO32g;溴甲酚绿0101%;琼脂115g;蒸馏水100ml;pH615。 改良马铃薯培养基(5号):马铃薯(去皮)200g煮出汁;脱脂牛乳100ml(016%);酵母膏5g;琼脂15g;加水至1000ml;pH710;配培养基时,脱脂牛乳90e、水浴30min,与其它成分分开灭菌,倒平板前混合。 蕃茄汁培养基(6号):蕃茄汁20g;脱脂牛乳10g;蛋白胨10g;琼脂6g;加蒸馏水至400ml;pH610~612。 11212 添加不同配料比较实验 选用平菇、马蹄、大葱、青瓜、胡萝卜、马铃薯各40g,煮汁,分别添加在乳酸菌分离培养基中,配制成6种添加不同配料的乳酸菌分离培养基。 11213 半固体培养基 除琼脂含量为013%外,其余成分均与固体培养基相同。 113 实验方法 11311 固体培养 取经多次活化的乳酸菌发酵奶1ml,用无菌水进行10倍系列均匀稀释,取10-6,10-7,10-8三种稀释度,用混合平板法培养,凝固后置于37e培养,24h后进行菌落计数,每天一次,并用直尺在放大镜下测量菌落、溶钙圈的大小。 11312 半固体培养 根据高层半固体琼脂培养基具有良好厌氧性能的原理,利用马向前等人研制的一种简便、快速的计数方法,在6种半固体培养基上对乳酸菌进行活菌计数[6]。将培养基融化,加入1ml乳酸菌发酵奶,以10倍系列均匀稀释。凝固后置37e培养,24h后计菌落数,每天一次,并用直尺在放大镜下测量菌落的大小。 二 结果 211 固体培养基的筛选 在上述6种固体培养基中,乳酸菌的生长情况见表1 从表1的结果可以看出,在6种培养基中,乳酸菌在乳酸菌分离培养基中生长最佳,第四天,活菌数达3197@108个/ml,第六天菌落直径达0190mm,溶钙圈直径达1140mm。其次是蕃茄汁培养基,第五天,活菌数达2130@108个/ml,菌落直径0112mm。乳酸菌生长最差的是214号培养基,第五天活菌数仅为0138@108个/ml,菌落直径为0104mm。 212 在乳酸菌分离培养基中添加不同配料的比较实验在乳酸菌分离培养基中添加不同配料,乳酸菌的生长情况见表2 表2的结果表明,在乳酸菌分离培养基中添加不同配料,以加入胡萝卜汁,乳酸菌生长最佳,第五天,活菌数达2138@109个/ml,为单一培养基活菌数的6倍。其次以加入平菇汁和大葱汁较好,第六天,活菌数分别达1125@109个/ml和1103@109个/ml,为单一培养基的311倍和216倍。生长较差的依次是青瓜汁、马铃薯汁和马蹄汁,与单一培养基对比,活菌数无明显变化。另外,添加不同配料,乳酸菌的菌落及溶钙圈大小均无明显变化。 213 乳酸菌在固体培养和半固体培养的比较按上述各种培养基配方,添加不同剂量的琼脂,制成固体和半固体两类培养基,接入乳酸菌进行培养,检测其生长情况,结果见表