植物细胞培养42955.pptVIP

* 第九章 植物细胞培养 9.1 植物细胞培养发展史 植物细胞培养起源于20世纪初,自从20世纪30年代以来,取得了长足发展. 植物细胞培养以Haberland提出的植物细胞全能性为依据,在植物组织培养的基础上发展起来的. 从目前研究状况来看,植物细胞培养的应用领域主要涉及以下三个方面: 1).有用代谢产物的生产 2).珍贵植物和名贵花卉等种苗的快速繁殖; 3).进行植物细胞遗传、生理生化和病毒方面的研究 9.2 植物细胞培养特性与基本培养技术 9.2.1 植物细胞培养的特性 与整株植物栽培比较： 1）不受气候条件、季节、地域的限制； 2）容易得到一定程度的调节控制； 3）选择性的生产所需的代谢产物; 与微生物相比,植物细胞培养不足之处 1).培养周期长细胞倍增时间长达24~72小时 2).植物细胞自身的性质. 例如植物细胞对剪切力敏感,易破碎,细胞的去分化和聚集的作用. 与动物细胞培养比较 植物细胞可以在简单的合成培养基上生长 9.2.2 基本培养技术 植物组织培养最基本的是无菌操作. 对于植物细胞培养技术来讲主要包括几个方面 1).必须选出能够生产所需天然产物的最高可能 产量而且有高生长速率的细胞系. 2).发展大规模培养植物细胞的培养基 3).确定与大规模生产相适应的最优培养条件 4).研究细胞分化与次生代谢产物的关系 培养方式来讲: 愈伤组织的固体培养;细胞或组织的悬浮培养. 对于工业化生产有用植物代谢物来说主要采用液体悬浮培养较为有利. 9.3 快速繁殖(自学) 9.4植物细胞遗传,生理,生化和病毒方面的研究(自学) 9.5 有用代谢产物的生产 阿吗碱,花色素,蒽醌,苄基异喹啉,小檗碱等. 由于植物细胞培养的成本较高,在高附加值产品生产上有广阔的前景. 例一:人参 人参对人体健康有抗癌、抗衰老、消除疲劳和增强人体免疫功能等有益作用。由于栽培技术的困难不能大量生产，人们对其有用成分的研究，发现人参皂苷是一种更有效的活性物质，通过对植株的不同部位细胞的研究结合不同的筛选手段得到生产力高的菌株，从而实现了细胞培养获得更高生物活性物质产量并具有更好选择性的培养方法。并且实现了商业化生产。 例产品二：紫杉醇 目前，主要利用红豆杉的树皮中提取，每公斤紫杉醇需要1000~2000棵树的树皮。利用细胞悬浮培养成为研究的热点。 由此可见植物细胞培养的工业应用必须满足以下条件： 1）.培养的细胞在遗传上应是稳定的以得到产量恒定的产物； 2）.细胞生长及生物合成的速度要求在较短时间内得到较高产量的最终产物。 3）.代谢产物要在细胞中积累而不迅速分解掉，而且最好是代谢产物释放到液体培养基中。 4）包括培养基，前体和化学提取的生产费用要低得足以给生产带来利润。 9.5.4影响因子 代谢产物的影响因子有化学因子（培养基的种类、无机盐、植物激素、诱导子），物理因子（光、温度、pH、氧），生物学因子分化、遗传形质）以及培养工程方面的因子（反应器型式、培养方式等）。 9.5.4.1培养基 设计的原则： 一是尽可能缩短细胞生长所需的培养时间；二是有利于目标产物的积累。 碳源 葡萄糖和蔗糖是常用碳源,其中植物细胞培养蔗糖对最优碳源,蔗糖能够促进细胞的生长有利于次级代谢产物的合成. 2.氮源 有机氮源对细胞的初级培养有利,虽然有些氨基酸植物细胞可以自己合成,但是加入一定浓度的氨基酸或蛋白质水解物对菌体的生长都很有利. 一般来说,低NH4+/NO3- 对植物细胞的生长有利,但不是说无 NO3-就好. 3. 磷源 是植物细胞生长的重要营养成分,对于细胞的生长和产物的合成都有显著影响. 4.植物生长激素及其类似物 激素一般分成两大类:生长素和分裂素. 生长素促进细胞分裂,最有效和最常用的有吲哚乙酸(IAA),2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和奈乙酸(NAA).生长素在植物细胞和组织培养过程中促使根的形成,最有效和最常用的是吲哚丁酸(IBA),吲哚乙酸和奈乙酸. 分裂素通常是腺嘌呤的衍生物。使用最多的是6-苄氨基嘌呤(BA)，6-糠氨基嘌呤(K)和玉米浆(Z)。 生长素和分裂素通常一起使用，来促进细胞的分裂、生长。其使用量在0.1~10mg/mL之间。根据不同的细胞株而异。 5.金属离子 金属离子对植物细胞的生长和产物的形成有不同的影响。 6. 前体 不同前提的添加量和添加时间对产物形成都有不同的影响。 7.诱导子 诱导子包括生物和非生物诱导剂 生物诱导剂一般是经过高压灭活的真菌细胞壁