双酶法制备淀粉糖浆.docVIP

双酶法制备淀粉糖浆 （黄雪莲、黄东雨、肖燕清、朱晓燕） 实验目的 掌握双酶法制备淀粉糖浆的方法； 通过酶解的条件优化制备出DE值高（60%）的淀粉糖浆。 二．实验原理 α-淀粉酶将淀粉或糖原长链分子水解成短链分子时，以无规则的方式切断淀粉或糖原大分子内部的α-1，4键而使淀粉生成糊精、寡糖、单糖等。糖化酶能从淀粉链或糖原链非还原性末端切开α-1，4键外，也能缓慢切开α-1，6键转化为葡萄糖。 三．实验药品与仪器 1. 药品：玉米淀粉，α-淀粉酶，糖化酶，费林试剂，亚甲基兰指示剂，葡萄糖， 5%Na2CO3 2. 烧杯，圆底烧瓶，容量瓶，移液管，滴定管，电子炉，恒温水浴锅，pH试纸 四．实验步骤 淀粉→ 调浆→ 糖化→ 灭酶→ 液化→ 灭酶→ 过滤→ 淀粉糖浆 1. 淀粉糖浆的制备 称取40克淀粉置于烧杯中，加水160mL，搅拌均匀，配成淀粉浆。用Na2CO3调节pH=6.0—6.5，于95-100℃水浴上加热，并不断搅拌，淀粉浆由开始糊化直至完全成糊。加入α-淀粉酶5u/g，不断搅拌使其液化，并保温30min。然后冷却到60℃，调节pH=4.5，加入糖化酶200u/g，于60-65℃恒温水浴中糖化12h，即制备出淀粉糖浆。 2. DE值的测定 (1) 试剂配制1）.次甲基蓝指示液10g/L:称取1.0g次甲基蓝，溶解于水并稀释至100ml。 2）.葡萄糖标准溶液2g/L：称取于100±2℃烘干至恒重的基准无水葡萄糖0.5000g,精确至0.0001g,加水溶解,洗入250ml容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，备用。 3）.费林试剂：按GB 603配制 A液：称取CuSO4.5H2O 69.32g定容至1000ml B液:称取酒石酸钾钠346g,氢氧化钠100g定容至1000ml。 (2) 空白液的标定： 预滴定时，先吸取费林溶液B，再吸取费林溶液A各5.0ml于150ml锥形瓶中,加水20ml,加入玻璃珠3粒,用50ml滴定管预先加入24ml的葡萄糖标准溶液,摇匀,置于铺有石棉网的电炉上加热,控制瓶中液体在120±15s内沸腾,并保持微沸,加2滴次甲基蓝指示液,继续以葡萄糖标准溶液滴定,直至蓝色刚好消失为其终点,整个滴定操作应在3min内完成。正式滴定时,预先加入比预滴定少1ml的葡萄糖标准溶液，操作同预滴定，并做平行试验,记录消耗葡萄糖溶液的总体积。取其算术平均数。 (3) 计算 式中:RP--费林溶液B、A各5mL相当十葡萄糖的质量，g; m1-称取基准无水葡萄糖的量，g; V1--消耗葡萄糖标准溶液的总体积，mL; 250--配制葡萄糖标准溶液的总体积，mLo 3. 操作步骤 1) 样液的制备 称取一定量的样品，称准至0.000lg(取样量以每100mL样液中含有还原糖量125-200mg为宜)，置于50mL小烧杯中，加热水溶解后全部移入250mL容量瓶中，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，备用。 2) 预滴定 按标定费林溶液操作，先吸取费林溶液B、再吸取费林溶液A各5.0mL于150mL锥形瓶中，加水20mL，加入玻璃珠3粒，用50mL滴定管预加入一定量的样液，将锥形瓶置十铺有石棉网的电炉上加热至沸，控制在120士15s内沸腾，并保持微沸，以样液继续滴定(滴加样液的速度约以每两秒1滴)，至溶液蓝色即将消失时，加入次甲基蓝指示液2滴，再继续滴加样液直至蓝色刚好消失为其终点，记录消耗样液的总体积。 3) 正式滴定 按上述操作吸取费林溶液B和A各5.0mL于150mL锥形瓶内，用滴定管加入比预测时耗用量约少1mL的样液十锥形瓶中，加热，使溶液在120士15s内沸腾，并保持沸腾状态与预测相同，继续以样液滴定至终点。整个滴定操作须在3min内完成。记录消耗样液的总体积。 4) 计算 式中：DE值--样品葡萄糖当量值(样品中还原糖占干物质的百分数)，%; RP--费林溶液B、A各5.0mL相当于葡萄糖的质量，g; m2--取样量，g; 250--配制样液的总体积，mL; V2--滴定时，消耗样液的体积，mL。 DMC--样品干物质(固形物)的含量，% 五．实验结果