BRAF激酶抑制剂的研究进展.docVIP

BRAF激酶抑制剂的研究进展摘要：MAPK信号转导通路能调控细胞的生长、增殖和分化，尤其在多种肿瘤细胞中异常活跃。BRAF激酶是Raf家族在MAPK信号通路中最重要的亚型，其过多表达或突变与肿瘤的发生密切相关，同时它的易激活、易突变和基础酶活高等特点使其成为抗肿瘤药物研发的热门靶标。因此，基于BRAF靶标的抗肿瘤抑制剂日益受到研究者的关注。本文对近来年国内外研究的BRAF抑制剂作一综述关键词：BRAF激酶；BRAF抑制剂；抗肿瘤促分裂素原活化蛋白激酶（MAPK）是人体内最重要的信号转导通路之一，在基因表达调控和细胞质功能活动中发挥关键作用。Raf是MAPK通路中重要的信号转导因子，承接上游Ras信号，传递给下游MEK/ERK，影响着细胞的生长和分化。BRAF作为Raf家族在MAPK信号通路中最重要的亚型，其过量表达或突变都可能诱发肿瘤的发生和发展[1]。因此基于BRAF靶标的BRAF抑制剂已成为抗肿瘤药物研发的热点。本文就近几年国内外对BRAF抑制剂在抗肿瘤方面的研究进展作一综述。1 BRAF激酶及活性调节BRAF激酶包含3个保守区域，分别是RAS结合域、富含丝氨酸/苏氨酸结构域和催化结构域。它的催化活性中心包括铰链区（hinge region， hinge）、磷酸环 （phosphate-binding loop， P-loop）、αC螺旋（αC helix） 以及活化环（activation loop， A-loop），并且与ATP结合位点有部分重合。同时，它存在活性（Type I）和非活性（Type II）两种构象。当处于Type I状态时，A-loop处于打开状态，但当A-loop起点的三个保守氨基酸（Asp594-Phe595-Gly596）组成的DFG基序围绕Asp594向αC helix方向旋转8A，出现一个疏水结合区（也称为变构结合位点），则转变成Type II构象。正常情况下，BRAF依靠P-loop与A-loop之间的疏水作用而维持着Type II构象，但当活化的Ras将BRAF招募至细胞膜时，A-loop上的Ser599和Thr602发生磷酸化，破坏了两者的稳定作用，DFG基序发生旋转，BRAF转变为Type I构象[2]。BRAF在7～8%的肿瘤细胞中存在突变，其中90%是braf基因外显子15的第1799位核苷酸T突变为A，导致其编码的600位缬氨酸被谷氨酸取代，即BRAFV600E。BRAFV600E突变模拟了野生BRAF S599/T602（BRAFWT）的磷酸化，破坏P-loop和A-loop之间的疏水作用，使BRAF在没有上游Ras激活的作用下仍然处于异常激活状态。这种突变使得BRAFV600E的激酶活性是BRAFWT的500倍，能持续性激活MEK/ERK信号通路，促进了肿瘤细胞增殖、分化和侵袭转移。2 BRAF抑制剂目前，根据抑制剂与激酶的不同构象相互作用，可将BRAF抑制剂也可分为I型抑制剂和II型抑制剂。2.1 I型抑制剂 型抑制剂结合BRAF的Type I构象，是ATP竞争性抑制剂。它主要通过模拟ATP的腺嘌呤环与铰链区形成氢键作用，锚定在激酶片层间，伸展开来的疏水基团占据ATP结合位点，而起到抑制激酶活性的效果。目前已成功上市的I型抑制剂是Vemurafenib （PLX4032）和Dabrafenib （GSK-）。2.1.1 Vemurafenib （PLX4032，1）Vemurafenib是一种新型的特异性BRAFV600E口服抑制剂，于2011年8月被FDA批准用于治疗BRAFV600E突变的晚期转移性或不能切除的黑色素瘤。该药物是片段药物设计原理的经典案例：Plexxikon公司对200万个小分子进行激酶抑制率初筛、共晶分析得到一个广谱的激酶抑制剂母核--7-氮杂吲哚（7-azaindole，2）；再通过计算机辅助设计、化学结构改造得到特异性BRAFV600E抑制剂先导物--PLX4720（3）；最后为改善药代动力学性质在母核5位插入一个苯环得到Vemurafenib[3]。Vemurafenib作为首个治疗黑色素瘤的个体化靶向药物，疗效迅速，治疗反应率良好；但靶标的专一性使其对机体的代偿作用和信号旁路无效，黑色素瘤患者常在Vemurafenib治疗8～9月后出现耐药性问题。目前，这种耐药性有望通过联合用药得到解决，GSK与Roche正在合作进行Vemurafenib的靶向疗法联合易普利姆玛（Ipilimumab）的免疫疗法来治疗晚期黑色素瘤的临床试验[4]。Steve等[5]根据生物电子等排原理改造Vemurafenib得到磺酰胺类BRAF激酶抑制剂4和5，其抑制BRAF的IC50分别为38和4.8nM。后续进一步结构改造得到酶（IC50=0.3nM）和细胞（IC50=