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第二章 菌种的制作 菌种的制作是食用菌栽培的前提和重要环节,菌种的优劣直接关系到食用菌的产量和质量,甚至关系到生产的成败。 菌种是指经人工培养并可供进一步繁殖或栽培使用的食用菌菌丝体,常常包括供菌丝体生长的基质在内,共同组成繁殖材料。 食用菌的菌种类型主要分固体菌种和液体菌种两类。我国目前食用菌栽培中所用的菌种绝大部分为固体菌种,液体菌种尚未大面积应用。 食用菌的菌种分三级,即母种、原种和栽培种。 母种是具有结实性的菌丝体纯培养物,也称一级种或试管种。 原种是由母种转接到木屑、棉籽皮、麦草、谷粒等为主的培养基上扩大培养而成的菌丝体纯培养物,也称二级种。 栽培种是由原种转接、扩大到相同或相似的培养基上培养而成的菌丝体纯培养物,直接应用于生产,也称三级种。 母种、原种和栽培种 第一节 母种的制作 通常分离或购买的母种数量有限,难以满足生产需要,因此,必须进行扩大繁殖。 第一节 母种的制作 一、培养基的制备 (一)常用的母种培养基配方(用量/1000 ml) 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA) 马铃薯(去皮)200 g, 葡萄糖 20 g, 琼脂 18-20 g,pH值自然。 第一节 母种的制作 (二)母种培养基的配制 去皮马铃薯200克,切成1cm见方的小块或2 mm厚的薄片,加水约1000 ml煮沸,再用文火煮20~30 min,并适当搅拌,用四层或八层预湿的纱布过滤,取滤液并加水至1000 ml。 向滤液中加入琼脂和葡萄糖,小火加热,搅拌至琼脂完全溶化。 分装试管。18 mm×180 mm或20 mm×200 mm的玻璃试管,分装量掌握在试管长度的1/4-1/5,原则上是摆放成斜面后,斜面的长度为试管长度的1/2-2/3。 塞棉塞。 第一节 母种的制作 母种培养基灭菌时,需用1.05~1.1 kg/cm2的压强,温度为121℃,灭菌(保持121℃)30 min。 温度与压强之间的关系 第一节 母种的制作 二、母种的转接 母种转接,也称转管、母种的继代培养。 由于分离或引进的原始母种数量有限,不能满足生产所需,因此,需进行扩大培养,通常原始母种允许扩大转接3~4次。 母种的转管次数不宜过多,否则会降低菌种的生活力,影响栽培效果。不具备条件和技术的部门不应扩接母种。 超净工作台 超净工作台的紫外灯 第一节 母种的制作 第一节 母种的制作 (三)培养 菌种培养关键是控制好环境的温度、湿度、空气和光线等条件,其中以温度最为重要。 空气相对湿度保持在60%左右,培养室的湿度过低时,可适当喷水,湿度过高时,应加强通风排湿,或向地面洒生石灰吸潮,以防杂菌滋生污染棉塞或培养基;同时避光并保持空气新鲜,从而使菌丝生长健壮。 第一节 母种的制作 2-3d后,检查菌丝的生长及杂菌污染情况,若在远离接种块的培养基表面出现独立的小菌落或奶油状小点,即为污染,应立即淘汰; 一般母种经7-10d 可长满培养基,然后用于进一步扩繁或置4℃冰箱中冷藏备用。 母种 第一节 母种的制作 (四)优质母种的一般标准 1.菌种纯正,无杂菌污染。 2.菌丝洁白浓密,气生菌丝量多。 3.菌丝不老化变色,培养基不萎缩失 水。 4.菌龄要适宜,一般室温保藏不超过 15d,4℃下冷藏不超过3个月。 第一节 母种的制作 菌种分离:采用无菌操作,将某种食用菌从混杂的微生物群体中分离出来进行纯培养,从而获得纯菌丝体的方法,称为菌种分离,分离所得的纯菌丝体即为原始母种。 依据分离材料的不同,菌种分离的方法可分为三类,即孢子分离法、组织分离法和基内菌丝分离法。 第一节 母种的制作 组织分离 组织分离是指在双核菌丝的组织体上切取一块组织,使其在培养基上萌发而获得纯菌丝体的方法,属于无性繁殖。 组织分离法可分为子实体组织分离、菌核组织分离和菌索组织分离。 第一节 母种的制作 组织分离的特点 简单易行 组织分离取材广泛,操作简便,分离成功率高。分离得到的菌种经出菇试验后可用于生产。 第一节 母种的制作 1.子实体组织分离的方法 (1) 种菇的选择 (2) 接种场地的消毒 同母种的转接。注意不要熏蒸和用紫外线照射种菇。 (3) 种菇的表面消毒 一般用75%酒精棉球擦拭即可。 取大型伞菌子实体菌柄与菌盖交界处或菌柄上部的菌肉,分离效果最好。 金针菇是横切菌盖上薄的菌肉或取未开伞的幼嫩子实体的菌褶片 灵芝组织分离所取的部位是菌盖边缘的白色生长圈 木耳等胶质菌类的菌肉薄,子实体经无菌水反复冲洗后,撕开子实体或用
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