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实验一 血涂片的制作及免疫细胞的形态观察 山东师范大学生命科学学院 杨桂文 一、实验目的 ①掌握微量采血及血涂片的制作方法 ②学习使用光学显微镜观察免疫细胞 二、实验原理 血涂片是临床化验中最常规的技术，也是血液学研究中的最基本技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，经瑞氏（Wright）染液染色后，不同免疫细胞中的颗粒可以呈现不同的颜色。根据细胞中颗粒的颜色、大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将免疫细胞进行分类计数。 三、实验器材 器材：医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗 净的载玻片等 试剂：瑞氏（Wright）染液，瑞特氏染料0.1克溶于60ml 甲醇中，过滤。贮褐色瓶中备用。（配置时，要 先将瑞特氏染料置研钵体内边研边滴加甲醇，使 染料溶液得更好。） 四、实验步骤 1．采血 采血前用70%酒精棉球消毒人的指腹或耳垂，干后用 采血针刺破指腹或耳垂的皮肤；动物采血时先将耳部剪 毛，酒精消毒后，刺破动物耳部皮肤，挤去第一滴血不要 （因含单核细胞较多）。 2．涂片 挤出第二滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光 滑的载玻片，斜置于血涂片的前缘，先向后稍移动轻轻触 及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以 30~40O为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄）， 轻轻将载玻片向前推进，即涂成血液薄膜（如图），推进 时速度要一致，否则血膜成波浪形，厚薄不匀。 3．染色 待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴瑞氏染液盖满 血膜为止，染色1~3min。然后滴加等量的缓冲液（pH6.4） 或蒸馏水冲去染液，吸水纸吸干，镜检。 4．封片 经染色的涂片完全干燥后，用中性树胶封片保存。 5．观察 分别用低倍、高倍和油镜观察血涂片，分辨不同的血 细胞类型。 五、实验报告 拍摄血细胞照片，标出并分析比较各种 免疫细胞类型和形态特征。 * * *
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