实验三、简单染色法幻灯片.ppt

实验三 细菌的简单染色 目的要求 学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。 初步认识细菌的形态特征。 学习显微镜（油镜）的使用方法，熟悉无菌操作技术。 简单染色：利用单一染料对菌体进行染色。 染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。前者赋予染料颜色特征，后者使染料能形成盐。 常用的微生物细胞染料都是盐，分酸性染料和碱性染料两大类：美蓝（即亚甲蓝）、结晶紫、碱性复红、番红（即沙黄）、孔雀绿等都属于碱性染料；酸性复红、伊红及刚果红属于酸性染料。 微生物染色原理 在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷；碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，易与细胞结合使其着色。 细胞处于酸性条件下（如细菌分解糖类产酸），所带正电荷增加，可采用酸性染料染色。 材 料 菌种 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 染色剂 仪器或其他用具： 显微镜 酒精灯 载玻片 接种环 香柏油 二甲苯 擦镜纸 生理盐水等。 简单染色方法 作业 实验报告 （结果部分：绘图说明金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的形态特征，注明观察时使用的物镜及放大倍数） 1、涂片 取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央滴一小滴生理盐水； 用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔； 将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。 注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。 2、干燥 将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。也可用电吹风低温吹干。 3、固定 手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次。 原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。 注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。 4、染色 将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。 染色时间： 吕氏碱性美蓝染色1~2min； 石炭酸复红染色约1min 草酸铵结晶紫染色约1min。 5、水洗 将细菌涂片上染液倒入废液缸中； 手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。 注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。 6、干燥 自然干燥：平放于室温，自然干燥； 吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干； 吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。 7、镜检 涂片干后镜检。 防止水的折射，以便于观察。 显微镜的基本结构（P41） 1. 物镜转换器 2. 物镜 3.标本夹 4.载物台 5.聚光器 6. 彩虹光圈 7.光源 8. 镜座 9. 电源开关 10. 光源滑动变阻器 11. 粗调螺旋（粗调节器） 12. 微调螺旋（细调节器） 13. 镜臂 14.镜筒 15.目镜 16.玻片夹推进器 显微镜使用操作步骤 1、观察前的准备 2、显微镜观察 3、显微镜使用完毕后的处理 1、观察前的准备 仔细阅读显微镜使用说明书 取镜（一手握镜臂，一手托底座） 显微镜的放置（平放，距边缘约10cm） 熟悉显微镜，检查显微镜 调节光源（光线均匀，亮度适宜） 调节双筒显微镜的目镜 调节聚光器数值孔径 检查显微镜物镜、目镜、聚光器 2、显微观察 观察程序如下： 放置观察标本 低倍镜观察 高倍镜观察 油镜观察 放置观察标本 将标本玻片置于载物台上(注意标本朝上)，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处于物镜的正下方。 低倍镜观察 下降低倍物镜，从侧面注视调节，使其接近标本。 双眼看目镜，慢慢旋转粗调节螺旋使镜筒缓慢升起，至视野内出现物象后，改用细调节螺旋，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象。 慢慢移动玻片夹推动器，寻找要观察的部位，置于视野中心，观察、记录结果，并准备换高倍镜观察。 高倍镜观察 将高倍物镜转至镜筒下方 (在转换物镜时，要从侧面注视，以防低倍镜未对好焦距而造成镜头与玻片相撞) 。 调节光圈和聚光镜，使光线亮度适中，再仔细转动微调螺旋，调节焦距，获得清晰物象，移动推动器选择最满意的镜检部位，待油镜观察。 油镜观察 用粗调螺旋将镜筒上升，转动转换器将油镜转至镜筒正下方。 在标本镜检部位滴上一滴香柏油。 从侧面注视，慢慢转动粗调螺旋，小心下降镜筒，使油镜浸入油中，并几乎与标本接触时为止(注意切勿压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头)。 调节聚光器及照明后，眼看目镜，微微转动粗调螺旋将镜筒上升，当视野中有模糊的标本物象时，改用细调螺旋，并移动标本直至标本物象清晰为止。 油镜的工作原理（P42） 1、增加照明亮度 2、增加显微镜的分辨