实验三幻灯片.ppt

医学微生物学实验 新乡医学院基础医学院科教科 3029945 内 容 提 要 一 肠道杆菌的鉴定 二 药敏试验 结果判断 SS平板：菌落的形态，颜色； 双糖铁培养基上生化特点； 革兰染色：形态，排列，染色特点； 药敏试验适应症 当某种细菌被认为是感染性疾病抗原，需要抗生素治疗而该细菌的药敏谱不能从其种属推知时，即需做药敏试验 正常菌群或已知目前对基本药物尚未出现耐药株的细菌不需要做药敏试验 意义 供临床医师选用抗菌药物的参考 细菌耐药性检测和耐药性变迁 评价新抗菌药物的药效学特征 对细菌耐药谱分析和分型有助于某些菌种的鉴定 做为院内感染流行病学调查的手段之一 属操作内容 每个实验台一个平板 密涂接种大肠杆菌贴片，标记及培养 每台4位同学可以每人涂一次及贴一种纸片 实验报告 粪便标本中肠道细菌的分离培养，鉴定结果和鉴定依据 下周实验内容 1.抗酸染色 2.病毒的接种（小鼠和鸡胚） 3.真菌菌落的形态观察 4.考试 2.密涂接种 分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。 顶部观 3.贴片 底部观 4.培养 置37℃温箱， 倒置培养18h-24h 青霉素 链霉素 庆大霉素 氯霉素 五、 结果 抑菌圈 抑菌圈直径 5.结果观察 抑菌圈直径≥15mm 高度敏感 抑菌圈直径10-15mm 中度敏感 抑菌圈直径≤10mm 低度敏感 无抑菌圈 不敏感或耐药 * * * 　　 主讲：马玉龙 Tel Email:looksea99@126.com 病原菌的检验程序 增菌培养 革兰染色 分离培养 接种琼脂斜面纯培养 采集标本 生化试验 血清学试验 动物试验 分析鉴定 革兰染色 观察菌落特征 概念：用生化的方法来检测细菌对各种基质的代谢作用及代谢产物，借以鉴别细菌种类，这种生化试验称为细菌的生化反应试验。 意义：是鉴别细菌的重要依据。 细菌的生化反应 生化反应 碳水化合物 代谢试验 各种酶类试验 抑菌试验 糖发酵试验 甲基红试验 V-P试验 蛋白质和氨基酸代谢试验 硫化氢试验 吲哚试验 碳源和氮源 利用试验 枸橼酸盐利用试验 IMViC试验 一 糖发酵试验 [原理] 根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。 1、确定细菌是否生长 2、产酸，则培养基指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以“+”表示。 3、产酸又产气，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气泡，用“　　”表示。 4、不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“-”表示。 [结果] [方法] 取糖发酵管培养基，此时培养基应呈澄清、紫色，倒立小管内无气泡，接种细菌后置37℃温箱培养18－24小时，观察结果。 大肠杆菌 伤寒杆菌 副伤寒杆菌 葡萄糖 + 乳糖 - - 二、硫化氢产生试验 [原理] 某些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸，如半胱氨酸、甲硫氨酸，而生成硫化氢。硫化氢遇培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀物。 [方法] 分别穿刺接种大肠杆菌、变形杆菌至两管醋酸铅培养基中。37℃孵育24小时后观察结果。 [结果] 沿穿刺线部位呈黑褐色， 表明有硫化氢产生，为阳性以“+”表示， 不变色者为阴性，以“-”表示。 大肠杆菌：- 变形杆菌：+ 肠道杆菌的鉴定 实验目的： 熟悉病原性杆菌的一般鉴定过程 粪 便→增菌培养（必要时） ↓ SS 培养基 ↓ 双糖铁培养基┒ ↓ ↓ 生化反应 血清学鉴定←┛ 肠道杆菌的鉴定程序 1、材料 粪便、ss平板 接种环和酒精灯等。 粪便中病原菌的分离 2、方法 将粪便标本以分区划线法接种到SS培养基，放入37℃温箱中培养24小时。取出 放4 ℃冰箱中保存备用 SS培养基 含有胆酸盐抑制G+，枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌，致病的沙门菌和志贺菌能大量生长。 含