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* 一、课题目标 说出被子植物花粉发育的过程及花药培养产生花粉植株的两种途径,说出影响花药培养的因素,学习花药培养的基本技术,尝试用月季或其他植物的花药进行培养。 二、课题重点与难点 课题重点:选取适宜的培养材料和培养基。 课题难点:选取适宜的培养材料和培养基。 基础知识 (一)被子植物的花粉发育 被子植物的花的结构是怎样的? 观察下图,和减数分裂比较,你能指出对应的时期吗?又有何特点? 被子植物的花粉发育 雌蕊: 花丝 花药:囊状结构,内有很多花粉粒 花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的,因此,花粉是单倍体的生殖细胞。 花粉的发育要经历:四分体时期、单核期、双核期 注意: ①二核花粉粒:成熟的花粉粒中,只含花粉管细胞核和生殖细胞核。(精子在花粉管中形成) ②三核花粉粒:有些植物的花粉,在成熟前,生殖细胞进行一次有丝分裂,形成两个精子,这样的花粉在成熟时,含有一个营养核和两个精子。 ③两个精子和一个营养核的基因型相同。 ④1花粉母细胞 4个小孢子 减分 有分 4个花粉管细胞核 4个生殖细胞核 有分 8个精子 人工种子 又称人造种子、合成种子或无性种子,就是将组织培养所产生的体细胞胚、不定芽、顶芽、腋芽或小鳞茎等繁殖体,包裹在能提供营养的胶囊(人造胚乳)里,再在外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜(人造种皮),造成一种类似种子的结构,能在一定的条件下萌发生长,形成完整植株。 (二)产生花粉植株的两种途径 有哪两种途径?原因是什么? 花药中的花粉 花药中的花粉 胚状体 愈伤组织 丛芽 丛芽 生根 移栽 花药培养产生花粉植株的两种途径 (三)影响花药培养的因素 1、材料的选择 不同植物 同一植物的不同生理状况(花期早期-初花期) 合适的花粉发育期(单核居中期与靠边期之间) 此外,植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等 2、培养基的组成 材料的选择: 花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般,月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬,即月季的初花期。 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说,在单核期,细胞核由中央移向细胞一侧的时期,花药培养成功率最高。 为了挑选到单核期的花药,通常选择完全未开放的花蕾。 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难? 答:花瓣松动后,微生物就可能侵入到花药,给材料的消毒带来困难。 实验操作 (一)材料的选取 染色镜检 (二)材料的消毒 酒精、氯化汞、次氯酸钙 (三)接种和培养 结果分析与评价 (一)材料的选取 选择花药时,一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。 最常用的方法有醋酸洋红法。但是,某些植物的花粉细胞核不易着色,需采用焙花青-铬矾法,这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 (二)材料的消毒 1、花蕾用V/V为70%的酒精浸泡30秒 2、无菌水清洗 3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟(也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液) 5、无菌水冲洗3~5次 用于培养花药,实际上多数未熟,由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护,通常处于无菌状态,所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。 (三)接种和培养 灭菌后花蕾,要在无菌条件下除去萼片和花瓣,并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时,要尽量不损伤花药(否则接种后,容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织),同时还要彻底去除花丝,因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 通常每瓶接种花药7-10个,温度控制在25℃左右,不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 一般经过20-30天培养后,会发现花药开裂,长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上,以便进一步分化出再生植株。
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