10-第4章酶工程与食品产业2课件.pptVIP

三、固定化酶技术 固定化酶（immobilized enzyme）：用物理的或化学的方法使不溶于水的酶与水不溶性大分子载体结合或把酶包埋在水不溶性凝胶或半透膜的微囊体中。 1、为什么要固定化酶？ 传统酶（自由酶）催化反应存在如下缺点： 传统酶催化反应几乎都在水溶液中进行，只能一次性使用，难以回收； 酶与产物混合，增加产物分离和纯化难度； 溶液中酶的稳定性差，容易失活。 而将酶固定化能够克服这些缺点。 2、固定化酶的优点 可以重复使用，在大多数情况下，稳定性明显提高； 催化后，酶与底物容易分开，产物易于分离纯化； 反应条件易于控制，可实现反应的连续化和自动控制； 酶的利用效率高； 更适合于多酶催化反应。 3、固定化酶的缺点 存在着酶失活现象； 消耗固定化材料，增加成本； 增加底物和产物的传质阻力。 4、固定化酶的主要方法 （1）载体结合法：将水不溶性的载体与酶结合。 离子吸附法：将酶与含有离子交换基团的水不溶性载体结 合。此法在工业上应用较广泛, 常用的载体有: a 阴离子交换剂, 如二乙氨基乙基(DEA E)－纤维素等; b 阳离子交换剂, 如羧甲基(CM ) －纤维素、纤维素－柠檬酸盐等。 （2）共价偶联法：将不溶性载体与酶蛋白以共价键形式结合成固定化酶的方法，包括重氮法、肽键法和烷化法等。 （3）包埋法：将游离酶包埋于格子或微胶囊内，格子的结 构可以防止酶渗出到周围的培养基中，而底物分子仍 能渗入格子内与酶接触。 （4）交联法：利用双功能或多功能试剂,使酶分子之间或酶蛋白与其它惰性蛋白之间发生交联,凝聚成网状结构,对酶行固定。 戊二醛是应用最广泛的双功能试剂。 DEAE — Cellulose 固定化过氧化氢酶 DEAE-Sephadex A-50 固定化氨基酰化酶 胶格包埋法固定化胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、 ?－淀粉酶 戊二醛交联固定化羧肽酶 固定化酶的应用（2）-----多酶催化 固定化酶的应用----酶传感器 血糖-乳酸分析仪 测定对象为葡萄糖和L-乳酸，固定化酶膜采用葡萄糖氧化酶和L-乳酸氧化酶经戊二醛固定化制成。固定化酶膜的保存期达1年，使用寿命乳酸膜为15天以上，葡萄糖膜为30天以上。 四、 有机介质中的酶反应 有利于疏水性底物的反应； 能催化在水中不能进行的反应； 可防止由水引起的副反应； 酶和产物易于回收； 可避免微生物污染。 1、有机介质中酶促反应的条件 必需水 酶的选择 溶剂及反应体系的选择 pH选择和离子强度的影响 必需水：紧紧吸附在酶分子表面，维持酶催化活性所必需 的最少量水，与溶剂中的水含量没有关系。 酶的选择： 脂肪酶、蛋白酶、次黄嘌呤氧化酶、过氧化氢酶等。 有机介质中酶催化的应用 酶 催化反应 应用 脂肪酶 肽合成 青霉素G前体肽合成 酯合成 醇与有机酸合成酯类 转酯 各类酯类生产 聚合 二酯的选择性聚合 酰基化 甘醇的酰基化 蛋白酶 肽合成 合成多肽 酰基化 糖类酰基化 羟基化酶 氧化 甾体转化 过氧化物酶 聚合 酚类、胺类化合物的聚合 胆固醇氧化酶 氧化 胆固醇测定 醇脱氢酶 酯化 有机硅醇的酯化 溶剂的选择： 水溶性有机溶剂：甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、甘油、丙酮、乙腈等 水不溶性的有：石油醚、己烷、庚烷、苯、甲苯、四氯化碳、氯仿、乙醚、戊醚等 有机溶剂的选择 pH选择和离子强度的影响 有机介质中酶反应应用（1） ------手性化合物的拆分 手性化合物：是指化学组成相同，而其立体结构互为对映 体的两种异构体化合物。 一种有显著疗效，另一种有疗效弱或无效 一种有显著疗效，另一种有毒副作用 两种对映体的药效相反 两