2第01章蛋白质课件.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 沉降系数是溶质颗粒在单位离心场中的沉降速度，用S表示。 一个S单位，为1×10-13秒 相对分子质量越大，S值越大 蛋白质的沉降系数：1～200S 由沉降系数S可根据斯维得贝格〔Svedberg〕方程计算蛋白质分子的相对分子质量： M=RST/D〔1－iρ〕 R：气体常数 T：绝对温度 D：扩散系数 ρ：溶剂的密度 3.凝胶过滤法 凝胶过滤所用介质为凝胶珠，其内部为多孔网状结构 一定型号的凝胶网孔大小一定，只允许相应大小的分子进入凝胶颗粒内部，大分子则被排阻在外 洗脱时大分子随洗脱液从颗粒间隙流下来，洗脱液体积小；小分子在颗粒网状结构中穿来穿去，历程长，后洗脱下来，洗脱体积大 测定蛋白质分子量一般用葡聚糖，商品名：Sephadex 测得几种标准蛋白质的洗脱体积〔Ve〕 以相对分子质量对数（logM）对Ve作图，得标准曲线 再测出未知样品洗脱体积〔Ve〕 从标准曲线上可查出样品蛋白质的相对分子质量 4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 SDS:十二烷基硫酸钠，变性剂 普通蛋白质电泳的泳动速率取决于荷质比（净电荷、大小、形状） 用SDS和巯基乙醇（打开二硫键）处理 蛋白质变性（肽链伸展）并与SDS结合，形成SDS-蛋白质复合物 不同蛋白质分子的均带负电（SDS带负电）；且荷质比相同（蛋白质分子大，结合SDS多；分子小，结合SDS少） 不同蛋白质分子具有相似的构象 用几种标准蛋白质相对分子质量的对数值对它们的迁移率作图 测出待测样品的迁移率 从标准曲线上查出样品的相对分子质量 ★影响迁移率的主要因素 凝胶的分子筛效应对长短不同的棒形分子会 产 生不同的阻力〔主要因素〕 凝胶的浓度和交联度 同一电泳条件下，分子小，受阻小，游动快，迁移率大。相对分子质量大者，迁移率小 ★ 优点：快速，样品用量少，可同时测几个样品 缺点：误差大，约为±10％（误差主要来源于迁移距离的测量误差） ★ 此方法只能测得 亚基肽链的相对分子质量 二. 蛋白质的两性离解和电泳现象 蛋白质与多肽一样，能够发生两性离解，也有等电点。在等电点时(Isoelectric point pI)，蛋白质的溶解度最小，在电场中不移动。 在不同的pH环境下，蛋白质的电学性质不同。在等电点偏酸性溶液中，蛋白质粒子带负电荷，在电场中向正极移动；在等电点偏碱性溶液中，蛋白质粒子带正电荷，在电场中向负极移动。这种现象称为蛋白质电泳(Electrophoresis)。 蛋白质在等电点pH条件下，不发生电泳现象。利用蛋白质的电泳现象，可以将蛋白质进行分离纯化。 三.蛋白质的胶体性质 由于蛋白质的分子量很大，它在水中能够形成胶体溶液。蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质，如丁达尔现象、布郎运动等。 由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。 Summary 蛋白质组成：氨基酸(种类、性质、特点、结构) 肽 蛋白质一级结构 蛋白质结构域 蛋白质高级结构(二、三、四级) 蛋白质的性质 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 亚基之间的结合力主要是疏水作用，其次是氢键和离子键。 四、蛋白质的四级结构 蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为蛋白质的四级结构。 有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条多肽链都有完整的三级结构，称为蛋白质的亚基 (subunit)。 血红蛋白的四级结构 　 　　一级结构→二级结构→超二级结构→结构域→三级结构→亚基→四级结构 蛋白质分子中的共价键与次级键 蛋白质结构与功能的关系 The Relationship between Structure and Function of Protein 第 三 节 （一）一级结构是空间构象的基础 一、蛋白质一级结构与功能的关系 牛核糖核酸酶的一级结构 二硫键 天然状态，有催化活性 尿素、 β-巯基乙醇 去除尿素、 β-巯基乙醇 非折叠状态，无活性 （二）一级结构与功能的关系 蛋白质一级结构不同，生物学功能各异 一级结构关键部位影响其生物学活性 一级结构变化与分子病 例：镰刀形红