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第三章 酶 目 录 第一节 酶的概念及作用特点 酶及生物催化剂概念的发展 酶的化学本质及类别 酶的活性中心和必需基团 胰凝乳蛋白酶的活性中心 羧肽酶结合底物前后构象变化 第二节 酶的命名和分类（略讲） 第三节 酶的纯化与酶活力测定 一、酶的分离纯化 1.纯化的目的：基础研究、实际应用 2.纯化的条件控制：温度、pH、缓冲液、特殊因子 3.纯化的方法：电泳、层析和离心等。 4.纯品酶的保存：浓缩、冻干、低温保存。 二、酶促反应速度的测定与酶的活力单位 酶促反应速度的测定与酶的活力单位 酶促反应初速度的概念 酶活力测定方法  酶活力的度量单位 第四节 酶的专一性及专一性假说 绝对专一性和相对专一性 消化道内几种蛋白酶对肽键的专一性 消化道蛋白酶作用的专一性 酶作用专一性机理 酶专一性的“锁钥学说” 酶专一性的“诱导契合学说” 第五节 酶催化的机制 酶催化的中间产物理论 与酶的高效率有关的主要因素 酶分子中可作为酸碱催化功能的基团 胰凝乳蛋白酶分子中催化三联体构象 底物浓度对反应速度的影响 单分子酶促反应的米氏方程及Km 酶促反应速度与底物浓度的关系曲线 米氏方程的推导 米氏常数的意义 米氏常数的测定 酶动力学的双倒数图线 激活剂对酶作用的影响 抑制剂对酶作用的影响 抑制剂类型和特点 专一性不可逆抑制剂 非专一性不可逆抑制剂 竞争性抑制作用 竞争性抑制曲线 非竞争性抑制作用 非竞争性抑制曲线 反竞争性抑制作用 反竞争性抑制曲线 有无抑制剂存在时酶促反应的动力学方程 pH对酶反应速度的影响 温度与酶反应速度的关系 第七节 酶的活性调节 酶的别构（变构）效应 酶的别构（变构）效应示意图 别构酶的序变模型 别构酶的齐变模型 别构酶与米氏酶的动力学曲线比较 ATCase的结构及其催化链的别构过渡作用 酶的共价修饰 蛋白质的磷酸化和脱磷酸化 酶的多种分子形式——同工酶 乳酸脱氢酶催化的化学反应 乳酸脱氢酶同工酶形成示意图 不同组织中LDH同工酶的电泳图谱 酶 原 的 激 活 胰蛋白酶原的激活示意图 问答题 由于这种调节的生理意义广泛，反应灵敏，节约能量，机制多样，在体内显得十分灵活，加之它们常受激素甚至神经的指令，导致级联放大反应，所以日益引人注目。 A P1 G F D C B H Ea-b Ec-d Ec-g 关键酶（限速酶） P2 某些酶可以通过其它酶对其多肽链上某些基团进行可逆的共价修饰，使其处于活性与非活性的互变状态，从而调节酶活性。这类酶称为共价修饰酶。目前发现有数百种酶被翻译后都要进行共价修饰，其中一部分处于分支代谢途径，成为对代谢流量起调节作用的关键酶或限速酶。 蛋白激酶 ATP ADP 蛋白质 蛋白质 P n 蛋白磷酸酶 nPi H2O 第一类：Ser/Thr型 第二类：Tyr型 第一类：Ser/Thr型 第二类：Tyr型 第三类：双重底物型 概念：存在于同一种属或不同种属，同一个体的不同组织或同一组织、同一细胞，具有不同分子形式但却能催化相同的化学反应的一组酶，称之为同工酶（isoenzyme） 类别：原级同工酶；次级同工酶 原级同工酶：由酶蛋白编码基因不同而产生的同工酶。次级同工酶：由基因转录产物mRNA或者翻译产物经过不同的加工过程产生的同工酶 实例：乳酸脱氢酶 研究意义：作为遗传的标志；作为临床诊断指标；研究某些代谢调节机制 NADH+H+ 乳酸 COOH CH(OH) CH3 丙酮酸 COOH C—O CH3 NAD+ + + 乳酸脱氢酶 多肽 亚基 mRNA 四聚体 结构基因 a b 乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱 + – H4 MH3 M2H2 M3H M4 点样线 M H 胰凝乳蛋白酶的作用机理 2、底物浓度 3、抑制剂 4、激活剂 5、pH （最适 pH的概念） 6、温度 （最适温度的概念） 1、酶浓度 当S足够过量，其它条件固定且无不利因素时，v=k[E] 第六节 酶促反应动力学(影响酶促反应速度的因素) 1、反应速度与底物浓度的关系曲线 （Michaelis—Menten曲线） 2、米氏方程的提出及推导 3、米氏常数的意义 4、米氏常数的测定 推导原则：从酶被底物饱和的现象出发，按照 “稳态”假说的设想进行推导。 米氏方程: 米氏常数: 令： 将（4）代入（3），则： [ES]生成速度： ，[ES]分解速度： 即： 则： (1) 经整理得： 由