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(2)C—端分析法 羧肽酶法: 羧肽酶是催化C-端氨基酸水解的特效酶。在羧肽酶作用下,只有靠近游离羧基的那个肽键发生水解,而其它肽键不变。 2、部分水解法 部分水解——将多肽用蛋白水解酶进行部分水解为许多 小肽,分离后逐个进行端基测定。 C-NH-CH-C-NH-CH-COOH R O R, O …… H2O 羧肽酶 余肽 CNH-CH-C-OH + NH2-CH-COOH …… R O R, C-端氨基酸 ~~~~ 新的C-端 O 蛋白水解酶对肽键的水解有催化作用,但每一种蛋白水 解酶只能水解一定类型的肽键,对肽键水解有高度的专一性。 赖氨酸精氨酸 (水解羧基上的肽键) 苯丙氨酸酪氨酸 (水解羧基上的肽键) 苯丙氨酸色氨酸 酪氨酸 (水解羧基上的肽键) 苯丙氨酸酪氨酸 色氨酸 (水解羧基上的肽键) 糜蛋白酶 胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 胃蛋白酶 蛋白水解酶 由8种α-氨基酸组成(丙、亮、 赖、苯丙、脯、丝、酪、缬氨 酸) 6mol / LHCl 110℃水解48h 例:某多肽 糜蛋白酶部分水解 八肽 三肽 酪氨酸 四肽 二肽 二肽 二肽 二肽 二肽 缬-亮 丙-脯 脯-苯丙 赖-丝 丝-缬 进一步水解,37℃, 6天 ,12mol /L HCl 进一步水解,37℃, 6天 ,12mol /L HCl 测定方法: N-端:丙氨酸 C-端:亮氨酸 ①完全水解 ②端基分析:测得 ③分子比: 1 :1 ④用糜蛋白酶进行部分水解 三肽排列有二种: 丙—脯—苯丙 苯丙—脯—丙 因端基分析N-端为丙氨酸,故三肽顺序应为:丙—脯—苯丙 四肽排列也有二种: 赖—丝—缬—亮 亮—缬—丝—赖 因端基分析,C-端为亮氨酸,故四肽顺序应为:赖—丝—缬—亮 故八肽的排列顺序为:丙—脯—苯丙—酪—赖—丝—缬—亮 第一种: 丙—脯 脯—苯丙 第二种: 苯丙—脯 脯—丙 第一种: 赖—丝 丝—缬 缬—亮 第二种: 亮—缬 缬—丝 丝—赖 §20-3 蛋白质 一、蛋白质的分类 蛋白质的种类繁多,可以从不同的角度,根据它们不同的特征进行分类。 1 、按形状分类 纤维蛋白质 球蛋白 分子呈细长形,排列成纤维状,一般不溶于水。该蛋白是动物组织的主要结构材料。如蚕丝、羊毛、头发、羽毛、指甲、皮肤等。 分子折叠,卷曲成球形,一般能溶于水,该蛋白质主要起着维护和调节的生命过程中的有关功能作用,如:酶、激素、蛋清蛋白等。 2、按化学组成分类 单纯蛋白 结合蛋白 仅由氨基酸单位组成。如白蛋白、球蛋白、谷蛋白等。 由单纯蛋白质与非蛋白质部分(称辅基)结合而成。 根据辅基的不同结合蛋白质又可分为 脂蛋白 单纯蛋白质与脂结合 糖蛋白 单纯蛋白质与糖类结合 磷蛋白 单纯蛋白质与磷酸结合 金属蛋白 单纯蛋白质与金属离子结合 血红蛋白 单纯蛋白质与血红素结合 核蛋白 单纯蛋白质与核酸结合 色蛋白 单纯蛋白质与有色化合物结合 如血红蛋白是由 球蛋白(单纯) 血红素(辅基) 唾液中的粘蛋白,所含的辅基为糖 核蛋白所含的辅基为核酸 3、按功能分类 二、蛋白质的结构 蛋白质的物理、化学性质和生物功能都依赖于它们的结构。 蛋白质的结构相当复杂,通常分为 一级结构 二级结构 三级结构 四级结构 (高级结构)统称空间结构 激素 起调节作用 抗体 起免疫作用 酶 起催化作用 收缩蛋白 主管机体的运动 核蛋白 传递遗传信息作用 血红蛋白 起输送作用 (初级结构) 1、蛋白质的一级结构 牛胰岛素的一级结构 一级结构 是指蛋白质分子链中各种氨基酸结合的顺序。 胰核糖核酸酶的一级结构 2、蛋白质的二级结构 蛋白质中有二种类型的二级结构 α-螺旋型 β -折叠型 (由肽链之间的 氢键所造成) (由两条肽链或一条肽链内两段肽链之间形成氢键) H-N C=O H-N C=O …… δ- δ + 氢键 二级结构 是由于肽键
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