第二章 微生物发酵产酶课件.pptVIP

酶 工 程 第二章 微生物发酵产酶 固体培养发酵 以麸皮、米糠等为主要原料，加入其它必要的营养成分，制成固体或半固体的麸曲，经过灭菌、冷却后，接种产酶微生物菌株，在一定条件下进行发酵，以获得所需的酶。适合霉菌的培养和发酵产酶，(原料便宜,操作简单,但传递营养物质困难,产量相对少)。 液体深层发酵 采用液体培养基，在生物反应器中，经灭菌、冷却后，接种产酶细胞，在一定条件下进行发酵，生产得到所需酶。 (酶的产率高，质量稳定，产品回收率高，是目前酶发酵的生产的主要方式。) 固定化细胞发酵 20世纪70年代后发展的技术，把微生物固定在水不溶性的载体上，进行多批次连续或间歇发酵。这种发酵具有：细胞密度大，产酶能力高；发酵稳定性好，可反复使用或连续使用较长时间；细胞固定在载体上，流失较少，可在高稀释率条件下连续发酵；发酵液含菌体少，利于产品分离。(额外成本高,须一定操作) 第一节 产酶微生物的特点 1)凡从可食部分或食品加工中传统使用的微生物生产的酶,安全! 2)由非致病微生物制取的酶,需作短期毒性实验。 3)非常见微生物制取的酶,需做广泛的毒性实验,包括慢性中毒实验。 2、大肠杆菌（Escherichia coli） 形态：短杆或长杆状，0.5～1.0×1.0～3.0 um，革兰氏阴性，运动(周毛)或不运动，无芽孢，一般无荚膜。菌落呈白色至黄白色，扩展，光滑，闪光。 Escherich属菌株和大多数大肠杆菌是无害，但也有些大肠杆菌是致病的，会引起腹泻和尿路感染。 大肠杆菌的名声主要因它易于在实验室操作、生长迅速，而且营养要求低。 应用： 大肠杆菌能作为宿主供大量的细菌病毒生长繁殖 大肠杆菌也是最早用作基因工程的宿主菌 工业上生产谷氨酸脱羧酶、天冬酰胺酶和 制备天冬氨酸、苏氨酸及缬氨酸，限制性核酸 内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、核酸外切酶， 胞内酶 11、假丝酵母（Candida） 假丝酵母的细胞圆形、卵形或长形。无性繁殖为多边芽殖，形成假菌丝，可生成厚垣孢子、无节孢子、子囊孢子。不产生色素。在麦芽汁琼脂培养基上菌落呈乳白色或奶油色。 假丝酵母是单细胞蛋白的主要生产菌。在酶工程方面可用于生产脂肪酶、尿酸酶、尿囊素酶、转化酶、醇脱氢酶。假丝酵母具有烷类代谢的酶系，可用于石油发酵；具有较强的17羟基化酶，可用于甾体转化制造睾丸素等。 第二节 酶发酵工艺条件及控制 根据实际情况选择使用，根据耗氧速率的改变而有效快捷地调节溶氧速率。 若溶氧速率低于耗氧速率，则细胞得不到所需的供氧量，必然影响其生长和产酶； 然而溶氧速率过高，对发酵也是不利的，一则造成浪费，二则在高溶氧速率下会抑制某些酶的生成，如青霉素酰化酶等；另外，为获得高溶氧速率而采用的大量通气或快速搅拌等措施会使某些细胞（如霉菌、放线菌、植物细胞和动物细胞、固定化细胞等）受到损伤。所以溶氧速率等于或稍高于耗氧速率即可。 4、 提高酶产量的措施 1）添加诱导物 对于诱导酶的发酵生产，在发酵培养基中添加适当的诱导物，可使产酶量显著提高。 诱导物一般可分为3类： (1)酶的作用底物 (2)酶的反应产物 (3)酶的底物类似物(一般不随着菌生长而产生浓度变化,因此效果好,但要注意其对菌的化学毒性) 2）控制阻遏物浓度 阻遏作用有产物阻遏和分解代谢物阻遏两种。阻遏物可以是酶催化反应产物，代谢途径的末端产物以及分解代谢物(葡萄糖等容易利用的碳源)。 控制阻遏物浓度是解除阻遏、提高酶产量的有效措施。 (2)控制阻遏物的浓度 3）添加表面活性剂 表面活性剂可分为离子型和非离子型两大类。 由于离子型表面活性剂有些对细胞有毒害作用，特别是季胺型离子表面活性剂(如“新洁而灭”等)是消毒剂，不能用于酶的发酵生产。 非离子型表面活性剂，如tween-80，有利于酶的分泌。 四、酶生物合成的模式 延续合成型的酶可受诱导 不受分解代谢物阻遏和产物阻遏。 在生长平衡期以后相当长所一段时间内继续用于酶的合成。因此该酶所对应的mRNA是相当稳定的， 3、中期合成型： （1）酶的合成在细胞生长一段时间以后才开始，而在细胞进入平衡期后，酶的合成也随着停止。 4、滞后合成型（水解酶）： （1）在细胞生长一段时间或者进入平衡期以后才开始其生物合成并大量积累。又称为非生长偶联型。 能在细胞停止生长后，进继续利用积累的mRNA进行翻译而合成酶，因此酶所对应的mRNA稳定性高。 产生原因： 由于受到培养基中存在的阻遏物的阻遏作用。只有随着细胞的生长，阻遏物几乎被细胞用完而使阻遏解除后，酶才开始大量合成。 若培养基中不存在阻遏