第五章双水相萃取课件.pptVIP

思考 一、双水相体系 （一）定义：因两种水溶性聚合物的水溶液，或一种水溶性聚合物水溶液与盐溶液混合时的不相溶性而形成有明显界面的两相或多相系统。 例如：葡聚糖（Dextran）与聚乙二醇（PEG）按一定比例与水混合，溶液混浊，静置平衡后，分成互不相溶的两相，上相富含PEG、下相富含葡聚糖，见下图（P80） （二）双水相的成相原因 聚合物的不相溶性： 当两种高分子聚合物之间存在相互排斥作用时，由于相对分子质量较大，分子间的相互排斥作用与混合过程的熵增加相比占主导地位，一种聚合物分子的周围将聚集同种分子而排斥异种分子，当达到平衡时，即形成分别富含不同聚合物的两相。这种含有聚合物分子的溶液发生分相的现象称为聚合物的不相容性。 （三）常用的双水相体系 （三）相图 相图的运用—指导 系线（P80） 二、双水相萃取技术 （一）定义：利用双水相的成相现象及待分离组分在两相间分配系数的差异，进行组分分离或多水相提纯的技术就叫做双水相萃取技术。 （二）原理：与液-液萃取技术相似，依据待分离物在两相（上相和下相）中的选择性分配（用分配系数来表征）。 （三）分配系数 其分配规律服从Nernst分配定律 CT、CB分别代表上相、下相中的溶质的浓度。研究表明，在相体系固定时，预分离物质在相当大的浓度范围内，分配系数K为常数，与溶质的浓度无关，只取决于被分离物质本身的性质和特定的双水相体系。 （四）影响物质分配平衡的因素 1、高聚物的影响：高聚物的分子量和浓度 2、盐类 3、pH值 4、温度 1、高聚物的影响 （1）高聚物的分子量 当聚合物的分子量降低时，蛋白质易分 配于富含该聚合物的相。例如在PEG—DeX系统中，PEG的分子量减小，会使分配系数增大，而葡聚糖的分子量减小，会使分配系数降低。这是一条普遍的规律，不论何种成相聚合物系统都适用 （2）高聚物浓度——界面张力的影响 成相物质的总浓度越高，系线越长，蛋白质越容易分配其中的某一相。 2、盐类 盐离子在两相中有不同的分配，因而在两相间形成电位差，由于各相要保持电中性，因此对于带电荷的蛋白质等物质的萃取来说 ,盐的存在就会使系统的电荷状态改变 ,从而对分配产生显著影响。 盐的种类对双水相萃取也有一定的影响 ,因此变换盐的种类和添加其他种类的盐有助于提高选择性。 在不同的双水相体系中盐的作用也不相同。在 PEG/磷酸盐 /水中加入氯化钠可以使万古霉素的分配系数由 4提高到 1 2 0 ,而在 PEG/DeX/水体系中只从 1 . 55提高到 5。 3、pH值 pH对分配的影响源于两方面的原因： pH会影响蛋白质中可以离解基团的离解度，因而改变蛋白质所带电荷和分配系数。 pH也影响磷酸盐的离解程度，若改变H2PO4-和HPO42-之间的比例，也会使相间电位发生变化而影响分配系数。pH的微小变化有时会使蛋白质的分配系数改变2—3个数量级。 4、温度 温度影响相图，特别在临界点附近，因而也影响分配系数， 温度越高发生相分离所需的高聚物浓度越高 三、双水相萃取的工艺流程 双水相萃取过程的步骤：双水相的形成、溶质在双水相中的分配、双水相的分离。 三步双水相萃取酶的流程，见图1 双相萃取的工艺流程，见图2 四、双水相萃取的特点 两种双水相体系的比较 五、双水相萃取技术的应用 到目前为止，双水相萃取应用及研究主要集中在以下几个方面： (1) 提取酶和蛋白质。这是双水相体系研究和应用最多的方面，发酵液、细胞培养液、植物、动物组织中细胞内、外的酶和蛋白质均可用双水相体系来提取。工业上已有几种双水相体系用于从发酵液中分离提取蛋白质和酶，绝大多数是用PEG作上相成相聚合物，葡聚糖、盐溶液和羟甲基淀粉的其中一种作下相成相物质。 六、双水相技术的进展及展望 新型双水相体系的开发主要有类廉价的双水相系统及新型功能双水相系统。 廉价双水相系统的开发目前主要集中在寻找一些廉价的高聚物取代现用昂贵的高聚物, 如采用变性淀粉、麦芽糊精、阿拉伯树胶等取代葡聚糖, 羟基纤维素取代PEG等。 对新型双水相系统的探索有：PEG/UCON(乙烯基氧与丙烯基氧共聚物的商品名）/水体系、UCON/水体系、EOPO[环氧乙烷(EO)和环氧丙烷(PO)的随机共聚物简称EOPO]/羟基淀粉/水体系和EOPO/水体系等。这些体系分相的依据仍是聚合物之间的不相溶性, 但此性质与特定的临界温度有关。此类双水相系统也被称作热分离型双水相系统, 它们的优点之