第六章 酶、细胞、原生质体固定化课件.ppt

优点：条件温和，操作简便，酶活力损失少。 缺点：结合力弱，易解吸附。 2.原生质体固定化 一般采用网格包埋法（即凝胶包埋法）。常用凝胶：琼脂凝胶，海藻酸钙凝胶，角叉菜胶和光交联树脂。 注意：一般要加渗透压稳定剂，以防止原生质体破裂。 1967年Updike等采用酶的固定化技术，将葡萄糖氧化酶固定在疏水膜上，然后再和氧电极结合，组装成了世界上第一个生物传感器——葡萄糖氧化酶电极。 1）酶传感器的原理 生物传感器 由生物识别单元（如酶、微生物、抗体等）和物理转换器相结合所构成的分析仪器。 生物识别元件(Biological recognition element) 是酶、抗原(体)、细胞器、组织切片和微生物细胞等生物分子经固定化后形成的一种膜结构，对被测定的物质有选择性的分子识别能力。 换能器(Transducer) 将识别元件上进行的生化反应中消耗或生成的化学物质，或产生的光或热等转换为电信号，并呈现一定的比例关系。 2）酶传感器的应用 水质监测 用化学法测定酚时，硫化物、油类等可干扰其测定。 从马铃薯中提纯、经吸附交联得到的固定化多酚氧化酶与氧电极构成酚传感器，可检测大多数酚类化合物。 大多数鱼死后5～20h，ATP，ADP和AMP已分解尽，超过24h，鲜度主要取决于IMP--肌苷---次黄嘌呤---尿酸。 将这三个步骤的三种酶（5’－核苷酸酶、核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶）固定在氧电极上，制成鱼鲜度测定仪。 当K＜20时，鱼极新鲜，可供生食。 K在20～40之间为新鲜，必须熟食。 K大于40，不新鲜，不宜食用，这与嗅觉检验结果相一致。 肉鲜度传感器 肉类在腐败过程中会产生各种胺类，故胺类测定能反映肉类的新鲜程度。 用腐胺氧化酶与过氧化氢电极构成多胺生物传感器，或用单胺氧化酶膜和氧电极组成的酶传感器测定肉在贮藏过程中的鲜度。 1.概念：固定化酶；固定化细胞 2.酶的固定化有几种方法？阐述其机理。 3.举一例说明固定化酶的应用？ 4.简述固定化原生质体制备的两个阶段。 （一）酶的活性 ： 通常低于天然酶（有例外）。 （二）酶的稳定性 酶的耐热性、对变性剂、抑制剂、蛋白酶的抵抗力增加。 可能的原因： ①固定化增加了酶活性构象的牢固程度， 可防止酶分子伸展变形； ②抑制酶的自身降解。 ③固定化部分阻挡了外界不利因素对酶 的侵袭。 如：氨基酰化酶， 70℃，15分钟，酶失去活性。 而固定化后， 70℃，15分钟，有80%活性。 （三）酶的最适温度 最适温度与酶稳定性有关。 多数酶固定化后热稳定性上升，最适温度也上 升（有例外）。 （四）酶的最适pH a.载体性质的影响 带负电荷载体 ：最适pH 向碱性偏移。 带正电荷载体 ：最适pH 向酸性偏移。 b.产物性质的影响 产物为酸性时，最适pH比游离酶高一些 产物为碱性时，最适pH比游离酶低一些 对于小分子底物，酶固定前后专一性基本相同。但大分子底物难于接近酶分子，导致酶的专一性发生改变。 （五）酶的作用专一性 与固定化酶相比，固定化细胞的情况比较复杂。 （1）细胞的存活率和稳定性提高。 （2）产率增加 。 （3）最适温度和最适pH常保持不变。 二、固定化细胞的性质 乙酰 -DL — 氨基酸 L — 氨基酸 +乙酸 乙酰 -D — 氨基酸 第三节 固定化酶与固定化细胞的应用 一、在工业生产上的应用 1. 氨基酰化酶（Aminoacylase） 世界上第一种工业化生产的固定化酶 酰化酶 泵 储 罐 反应产物 离心机 消旋反应器 固定化酶柱子 晶体 L-Ala L-Ala A-D-Ala A-L-Ala A-D-Ala 2.葡萄糖异构酶 世界上生产规模最大，应用最为成功的一种固定化酶。 二、固定化酶在医学上的应用 1. 消血栓： 纤溶酶是异源蛋白质，在人体内引起免疫反应，无法长期使用。 酶的不稳定性使其在较短的时间内失活。 用包埋法制备的酶固定化技术可克服上述弊端，酶在囊中不能漏出，小分子物质能自由进出。 2. 人工肾： 原理：将病人血液中的尿素经脲酶水解成氨，再用活性炭吸附。即：用固定化脲酶和微胶囊活性炭组成人工肾。 酶传感器 固定化酶和电化学传感器的结合。 优点： ①既有不溶性酶体系的优点，又具有电化学电极的高灵敏度； ②酶的