ch06工作曲线法测定芦丁含量.ppt

实验六 工作曲线法测定芦丁含量 可见分光光度法 一、分光光度法的特点二、可见分光光度法与紫外的区别三、分光光度计测定物质含量的原理四、工作曲线法测定芦丁含量五、本次实验注意事项六、仪器的操作 内容 分光光度法与其他测定方法比较有这样一些特点 1、首先，它的应用广泛，在国际上发表的有关分析的论文总数中，分光光度法占28%，我国约占所发表论文总数的33%。 2、灵敏度高，由于新的显色剂大量合成，并在应用研究方面取得了重要进展，使得测定物质的灵敏度提高。 3、选择性好，目前有些元素只要控制适当的显色条件就可以直接进行光度法测定。 4、准确度高，浓度测量的相对误差在1～3%范围 5、分析成本低，操作简便快速。 分光光度法的特点（包括紫外和可见） 可见分光光度法与紫外的区别： 1、光源不同，紫外用氢灯作光源，可见用钨灯 2、测定波长不同，紫外波长范围180～350nm 可见波长范围320～1000 3、可见需显色，紫外不需显色 可见分光光度测定中通常是被测物质与显色剂反应，生成有色物质，然后测定其吸光度，进而求得被测物质的含量。 分光光度计测定物质含量的原理： （紫外与可见基本相同） 均采用一个能产生多个波长的光源，通过系列分光装置后产生特定波长的光源，其透过被测 样品后，部分光源被 吸收，计算样品吸光 值，由比尔-朗白定律 求得样品的浓度。 一、实验目的 （1）掌握可见分光光度计的使用 （2）掌握光电比色的一般操作。 （3）学会用作图法及计算器回归法求芦丁样品的浓度 工作曲线法测定芦丁含量 芦丁又名芸香甙，维生素P，属黄酮类化合物，临床主要用于治疗脑溢血，高血压，视网膜出血等疾病。 黄酮类化合物的结构性质 结构中含有酚羟基和环酮基结构，可与某些金属盐试剂生成有色络合物，在510nm波长 处有吸收，用可见分光光度计测 其含量。 本实验利用黄酮甙与亚硝酸钠、 硝酸铝反应在碱性时显红色的 反应测定芦丁的含量。 二、实验原理 1 显色反应的完全程度（取决于）： 介质的pH 显色剂的用量 反应温度 反应时间  要使得测定浓度准确应当考虑影响测定准确的因素： 2 吸光度的物理测定条件 如何确定反应最佳条件 在建立方法时，需要通过实验确定最佳反应条件，为此改变其中一个因素（例如介质的pH值暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液的吸光值，通过吸光度-pH曲线确定反应的酸度范围，其他几个影响因素的适宜值也可以按这一方法分别确定。 三、实验内容 仪器 光电分光比色计 使用方法见附件 比色皿的校核 将同样厚度的四个比色皿分别编号标记，都装空白溶液，在所用波长（510nm）下比较各比色皿的透光率，应相同，若有显著差异，应将比色皿重新洗涤后再装空白溶液测试，经洗涤可使透光率的差异减小时，可通过多次洗涤使透光率一致。 若经几次洗，仍然不一致可如下校正：以透光率最大的比色皿为100%透光，测定其余各皿的透光率，分别换算成吸收度作为各比色皿的校正值。测定溶液时，以上述100%透光率的比色皿作空白，用其他各皿装溶液，测得吸收度值然后碱去所用比色皿的校正值。 芦丁的测定（标准曲线制备与芦丁测定一起完成） 精密移取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml和样品液3.0ml置10ml容量瓶中→各加30%乙醇使成5.0ml→各精密加入亚硝酸钠溶液（1→20）0.3ml，摇匀，放置6分钟→各加硝酸铝（1→20）0.3ml，摇匀，再放置6分钟→各加氢氧化钠试液4ml,用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。 在510nm波长下测定各瓶溶液的吸收度（以第一瓶作空白）以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。测定样品的浓度。 芦丁的测定各试剂用量 编号 1 2 3 4 5 6 7 标准溶液(ml) 0 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 样品溶液(ml) 3.00 30%乙醇(ml) 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 2.00 NaNO2(ml) 都加0.30ml，摇匀后放置6分钟 Al(NO3)3(ml) 都加0.30ml，摇匀后放置6分钟 NaOH(ml) 都加4ml，摇匀后放置15分钟后在510nm条件下测定A 结果 1、列出浓度C与吸光度A对应表格 2、用作图法绘制芦丁工作标准曲线 3、用计算器回归求标准曲线方程A